[發(fā)明專利]自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110406571.5
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113101303B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏霞蔚;何雪梅;魏于全
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P1/16;A61P11/00;A61P19/08;A61P25/00;C12N5/0775
• 代理公司: 成都虹橋?qū)＠聞?wù)所(普通合伙) 51124
• 代理人: 黃鑫

本發(fā)明涉及自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法及用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。一方面，本發(fā)明提供了自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，包括如下步驟：取間充質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞于另一培養(yǎng)皿中，放置后仍未貼壁的細(xì)胞即為自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞。另一方面，本發(fā)明提供了自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞在制備修復(fù)組織損傷的藥物中的用途。本發(fā)明通過建立肝損傷、肺損傷和脊髓損傷模型，注射MSCs和DMSCs對損傷小鼠進行治療，結(jié)果顯示DMSCs具有與MSCs類似的減輕組織損傷促進組織修復(fù)的作用，為受損組織修復(fù)提供了一種新的細(xì)胞治療策略。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法及用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal?stem?cells，MSCs)是從骨髓、脂肪組織、臍帶等組織分離出來的一種具有自我復(fù)制能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞。在特定條件下，MSCs可分化成神經(jīng)細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞等。此外，MSCs具有易于分離、擴增和純化，免疫原性低、不易引起移植后的排斥反應(yīng)等特性。這些優(yōu)良特性使MSCs成為再生醫(yī)學(xué)、受損組織修復(fù)等細(xì)胞治療策略的候選細(xì)胞。目前，MSCs已被運用于心肌梗死、肝功能衰竭、肺損傷、中風(fēng)、造血功能障礙等多種疾病的治療，研究表明MSCs對上述疾病均有較好的治療作用。

然而，針對無活力的間充質(zhì)干細(xì)胞，尤其是自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞在疾病治療中的作用，迄今還鮮有文獻報道。Gupta等用H₂O₂誘導(dǎo)產(chǎn)生凋亡MSCs，但注射后對LPS誘導(dǎo)的肺損傷并沒有展現(xiàn)出改善作用(參見：Gupta?N,Su?X,Popov?B,et?al.Intrapulmonarydelivery?of?bone?marrow-derived?mesenchymal?stem?cells?improves?survival?andattenuates?endotoxin-induced?acute?lung?injury?in?mice[J].J?Immunol,2007,179(3)：1855-63)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的目的之一在于提供自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法。本發(fā)明的另一目的在于提供自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞在制備修復(fù)組織損傷的藥物中的用途。

本發(fā)明提供了自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞在制備修復(fù)組織損傷的藥物中的用途。

進一步地，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓、脂肪和/或臍靜脈來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。

進一步地，所述的藥物是以自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分，制備而成的制劑。

進一步地，所述的制劑為注射制劑。

優(yōu)選地，所述的制劑為靜脈注射制劑。

進一步地，所述的藥物是修復(fù)肝損傷、肺損傷、脊髓損傷的藥物。

本發(fā)明提供了自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，包括如下步驟：取間充質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞于另一培養(yǎng)皿中，放置后仍未貼壁的細(xì)胞即為自發(fā)性凋亡的間充質(zhì)干細(xì)胞。

進一步地，間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)至4～6代時，收集培養(yǎng)基中漂浮的細(xì)胞；放置時間為12～24h。

進一步地，所述培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基由如下方法得到：取DMEM低糖培養(yǎng)基，加入胎牛血清以及青霉素和鏈霉素，胎牛血清的終濃度為8～12％w/w，青霉素的終濃度為80～120U/ml，鏈霉素的終濃度為80～120μg/mL，混勻。

進一步優(yōu)選地，所述DMEM低糖培養(yǎng)基的葡萄糖濃度為0.8～1.2g/L。

進一步地，所述的間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓、脂肪和/或臍靜脈來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。