[發明專利]一種雙佐劑新型冠狀病毒滅活疫苗的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202110404419.3
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113304257A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 沈吉友;許定花;陳燕;王瑞博;劉家勝;張弓;李方仲;柯江偉;龔昱彬;邵彥;邵聰文;張翊
• 申請（專利權）人: 浙江天元生物藥業有限公司;南京華普生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61K39/39;A61P31/14;A61P37/04
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

本發明公開了一種雙佐劑新型冠狀病毒滅活疫苗的制備方法及應用，具體步驟如下：新型冠狀病毒滅活原液按規定的同一蛋白質含量或抗原含量進行配制后，添加CpG佐劑和鋁佐劑，其中，新冠病毒抗原總蛋白含量2?4μg/ml，CpG含量為5?40μg/ml，鋁含量450μg/ml。本發明有益的效果：該方法制成的雙佐劑新型冠狀病毒滅活疫苗可以有效提高當前鋁佐劑新型冠狀病毒滅活疫苗的血清效價和中和抗體水平；同時有效降低抗原用量，同時降低生產成本，提高疫苗產率以及未來全球新冠疫苗的使用覆蓋率，造福人類。

技術領域

本發明涉及滅活疫苗領域，主要是一種雙佐劑新型冠狀病毒滅活疫苗的制備方法及應用。

背景技術

2019年12月末發生嚴重急性呼吸道綜合癥疫情，病原學檢測結果證實為一種新型冠狀病毒，隨后細胞分離獲得新型冠狀病毒株。國際病毒分類委員會將該新型冠狀病毒命名為重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratory syndromecoronavirus2，SARS-CoV-2)，WHO將該病毒導致的疾病命名為新型冠狀病毒肺炎(coronavirus disease2019，COVID-19)，屬于β冠狀病毒家族。這是已知的第七種感染人類的冠狀病毒；四種冠狀病毒(229E,NL63,OC43，和HKU1)只會引起輕微感冒癥狀。相反，其他三個，SARS-CoV,MERS-CoV，和SARSCoV-2能引起嚴重癥狀甚至死亡，死亡率分別為10％、37％和5％。

SARS-CoV-2表面覆蓋著大量的糖基化S蛋白，糖基化S蛋白與宿主細胞受體血管緊張素轉換酶2(ACE2)結合，介導病毒細胞進入[Letko M,Marzi A,Munster V.Functionalassessment of cell entry and receptorusage for SARS-CoV-2and other lineage Bbetacoronaviruses.Nat Microbiol.2020；5:562–9.]。當S蛋白與受體結合，TM蛋白酶絲氨酸2(TMPRSS2)(一種位于宿主細胞膜上的2型TM絲氨酸蛋白酶)通過激活S蛋白促進病毒進入細胞。一旦病毒進入細胞，病毒RNA就會釋放出來，多蛋白從RNA基因組翻譯出來，通過蛋白質裂解和復制酶-轉錄酶復合物的組裝來復制和轉錄病毒RNA基因組。病毒RNA被復制，結構蛋白被合成，在宿主細胞中組裝和包裝，之后釋放病毒顆粒。在自然狀態下，新冠病毒S蛋白以無活性前體狀態存在，病毒傳染過程中，靶細胞蛋白酶通過將其裂解為S1和S2亞基使S蛋白活化[Bertram S,Dijkman R,Habjan M,Heurich A,Gierer S,Glowacka I,etal.TMPRSS2 activates the human coronavirus 229E for cathepsin-independenthost cell entry and is expressed in viral target cells in the respiratoryepithelium.J Virol.2013；87:6150–60.]，這是病毒進入靶細胞后活化膜融合域所必須的[Hoffmann M,Kleine-Weber H,Schroeder S,Kruger N,Herrler T,Erichsen S,etal.SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by aclinically proven protease inhibitor.Cell.2020；181:271–80.e8.]因此，S蛋白是SARS-CoV-2的所有結構蛋白的主要抗原成分。與其他功能蛋白不同，它負責誘導宿主免疫反應，靶向S蛋白的抗體可以誘導針對病毒感染的保護性免疫。S蛋白的特異性效價是疫苗保護作用的重要標志。