[發明專利]一種斑玉蕈強啟動子及其應用

有效

• 申請號: 202110404302.5
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN112921041B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 尚俊軍;鮑大鵬;鄒根;楊瑞恒;唐利華;萬佳寧;周陳力;李焱;茅文俊;李燕;汪瀅;龔明
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/80
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 王江南

本發明公開了一種斑玉蕈強啟動子及其應用，其中，所述啟動子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明選擇并設計的HmGPD啟動子高效地驅動外源基因在斑玉蕈中表達，為通過遺傳方法改良符合生產需求和消費者喜愛的斑玉蕈新品種奠定基礎，具有良好的市場應用前景。

技術領域

本發明屬于啟動子技術領域，具體涉及一種斑玉蕈強啟動子及其應用。

背景技術

斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)又名蟹味菇、鴻喜菇或海鮮菇等，在分類學上隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、傘菌目(Agaricales)、離褶傘科(Lyophyllaceae)、玉蕈屬(Hypsizipus Singer)。斑玉蕈自二十世紀八十年代引入我國開始栽培后，已經從栽培條件、栽培原料、藥理作用和營養價值等多方面展開研究。通過現代遺傳學方法改良品種是斑玉蕈產業發展的迫切需求，而分子生物學工具的缺乏是斑玉蕈遺傳研究中的瓶頸。啟動子作為控制基因轉錄的重要順式元件，在基因表達中起著至關重要的作用，在遺傳轉化實驗中選擇合適的啟動子是提高外源基因表達水平的關鍵。

甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GPD)是糖酵解途徑中的關鍵酶之一，催化NADH依賴性的二羥丙酮磷酸轉化為甘油-3磷酸。由于功能保守，GPD基因在人類、動物、植物和真菌中廣泛存在。

因此，開發一種可用于高效驅動外源基因增強表達的啟動子，從而為斑玉蕈的遺傳轉化研究提供重要工具，是有待解決的技術問題。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

作為本發明其中一個方面，本發明提供一種斑玉蕈強啟動子，其中：所述啟動子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作為本發明所述的斑玉蕈強啟動子的一種優選方案：所述啟動子，其擴增引物序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。

作為本發明的另一個方面，本發明提供所述的斑玉蕈強啟動子在斑玉蕈中表達外源基因中的應用。

本發明的有益效果：本發明在多種基因啟動子中經過大量研究篩選，優選了HmGPD基因并設計出HmGPD啟動子，能夠高效地驅動外源基因在斑玉蕈中表達，為通過遺傳方法改良符合生產需求和消費者喜愛的斑玉蕈新品種奠定基礎，具有良好的市場應用前景。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可以根據這些附圖獲得其它的附圖。其中：

圖1為斑玉蕈轉化質粒HmGPD-p021的PCR引物示意圖；

圖2為斑玉蕈轉化質粒CaMV35S-p012的PCR引物示意圖；

圖3為RT-PCR檢測CaMV35S-p012轉化子中外源基因的表達和內含子的切割；

圖4為RT-PCR檢測HmGPD-p021轉化子中外源基因的表達；

圖5為RT-PCR檢測HmGPD-p021轉化子中內含子的切割；

圖6為CaMV35S-p012和HmGPD-p021轉化子花青素合成基因的相對表達量。

具體實施方式

為使本發明的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合具體實施例對本發明的具體實施方式做詳細的說明。