[發明專利]iPSC來源外泌體的制備方法、iPSC來源外泌體修復劑和iPSC來源外泌體的應用

在審

• 申請號: 202110403875.6
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113106069A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 黃國濱;周紅艷;李愛群;魯浩;龔春麗;葛圓圓
• 申請（專利權）人: 珠海樂維再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/86;A61K35/545;A61P17/02
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 馮潔

本發明涉及皮膚修復技術領域，具體而言，涉及iPSC來源外泌體的制備方法、iPSC來源外泌體修復劑和iPSC來源外泌體的應用；本發明提供的iPSC來源外泌體的制備方法制備出的誘導多能干細胞來源外泌體應用于皮膚損傷修復效果良好，且效果穩定。含有本發明制備方法制備的誘導多能干細胞來源外泌體的iPSC來源外泌體修復劑在皮膚損傷修復的效果佳，且效果穩定。

技術領域

本發明涉及皮膚修復技術領域，具體而言，涉及iPSC來源外泌體的制備方法、iPSC來源外泌體修復劑和iPSC來源外泌體的應用。

背景技術

干細胞(stemcell)是一類具有自我復制能力的多潛能細胞。在特定條件下，可以分化為多種功能細胞。根據干細胞所處的發育階段分為胚胎干細胞和成體干細胞。干細胞是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官的潛在功能，被稱為“萬用細胞”。皮膚處于人體的最外層，能夠讓機體免受病原體的侵害，是人體最大的一個器官。皮膚組織經常發生不同程度的損傷，如機械性損傷、燒傷、燙傷以及糖尿病足引起的潰瘍等急性或者慢性的損傷，這不僅影響了個人的身體健康，還給社會帶來了巨大的經濟負擔。相關技術中將干細胞應用于皮膚修復與再生，其主要依靠旁分泌的方式來促進皮膚的損傷后修復。

外泌體作為干細胞的旁分泌因子，其能夠促進成纖維細胞的增殖以及遷移、調節炎癥反應以及抑制瘢痕形成等方面來促進皮膚損傷后的修復與再生。

但是，相關技術提供的外泌體在皮膚損傷修復中的作用不佳，且效果不穩定。

發明內容

本發明的目的在于提供iPSC來源外泌體的制備方法、iPSC來源外泌體修復劑和iPSC來源外泌體的應用，iPSC來源外泌體的制備方法制備出的誘導多能干細胞來源外泌體的皮膚損傷修復作用良好，且效果穩定，含有誘導多能干細胞來源外泌體的iPSC來源外泌體修復劑的皮膚損傷修復作用良好，且效果穩定。

本發明是這樣實現的：

第一方面，本發明提供一種iPSC來源外泌體的制備方法，包括：

用DF12+10％FBS培養基培養間充質干細胞；對培養后的間充質干細胞消化、離心；加入仙臺病毒重懸細胞于離心后的間充質干細胞，并離心、培養；之后更換完全培養基繼續培養；再更換DF12+10％FBS和Stemflex的混合培養基繼續培養；之后再每間隔一段時間更換Stemflex培養基繼續培養，以培養出誘導多能干細胞；

將培養出的誘導多能干細胞純化處理，得到純化后的誘導多能干細胞；

培養純化后的誘導多能干細胞，并收集培養后得到的第一上清液；將第一上清液離心，得到第二上清液；收集第二上清液離心，得到第三上清液；將第三上清液離心。

在可選的實施方式中，加入仙臺病毒重懸細胞于離心后的間充質干細胞后，將其接種于Matrigel。

在可選的實施方式中，將培養出的誘導多能干細胞純化處理，包括：將培養出的誘導多能干細胞培養一段時間后，取單克隆至Matrigel中繼續培養，在單克隆的密度達到70％-90％時，消化傳代培養。

在可選的實施方式中，將第一上清液離心時的溫度為3℃-5℃；和/或，

將第二上清液離心時的溫度為3℃-5℃；和/或，

將第三上清液離心時的溫度為3℃-5℃。

第二方面，本發明提供一種iPSC來源外泌體修復劑，iPSC來源外泌體修復劑的原料包括：羥丙基殼聚糖、甘油、聚乙二醇、山梨酸、羥乙基纖維素和前述實施方式任一項的iPSC來源外泌體的制備方法制備出的誘導多能干細胞來源外泌體。

在可選的實施方式中，iPSC來源外泌體修復劑的制備方法包括：將羥丙基殼聚糖、甘油、聚乙二醇、山梨酸和水混合、溶解，再添加羥乙基纖維素，混合；滅菌后添加誘導多能干細胞來源外泌體。