[發(fā)明專利]哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110403637.5
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113113078A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設計）人: 張學明;朱文倩;楊蕊;張博洋;朱春玲
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G16B5/00
• 分類號: G16B5/00;G16B25/10;G16B45/00
• 代理公司: 北京華際知識產(chǎn)權代理有限公司 11676
• 代理人: 曹書華

1.哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：研究所取用荷斯坦公牛的小牛睪丸，添加冷凍保護劑后于液氮中凍存；

S2:將戊巴比妥鈉麻醉劑和戊巴比妥鈉粉末溶于生理鹽水中，完全溶解后用濾器過濾，并在低溫條件下保存；

S3：選取免疫缺陷鼠全身麻醉后仰臥保定，于陰囊處做一微型切口，牽拉睪丸至切口外，鉗夾精索將睪丸摘除，鑷子在酒精燈火焰上灼燒后將斷端燒烙止血，精索和脂肪墊還納腹腔后縫合切口；

S4：凍存的犢牛睪丸組織于適當溫度水浴鍋中復蘇，并剪切成多個較小組織小塊，置于冰上備用；

S5：小鼠俯臥保定后，在脊柱兩側分別做多個微型切口，將冷凍復蘇后的犢牛睪丸組織小塊植入切口內(nèi)，并與切口一并縫合固定，每個切口注射一定量基質(zhì)膠，傷口涂布碘伏消毒，放回籠內(nèi)密切觀察小鼠狀態(tài)。

2.根據(jù)權利要求1所述的哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，根據(jù)步驟S1：研究所用的小牛睪丸取自1日齡、30日齡的荷斯坦公牛，冷凍保護劑的組成成分包括：75％基礎培養(yǎng)基KnockoutDMEM，10％血清替代物KSR，10％二甲基亞砜DMSO，5％青-鏈霉素，其中青霉素濃度為10000Units/mL，鏈霉素濃度為10000μg/mL。

3.根據(jù)權利要求1所述的哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，根據(jù)步驟S2：采用2％戊巴比妥鈉麻醉劑：2g戊巴比妥鈉粉末，同時溶于100mL生理鹽水中，通過0.22μm的濾器進行過濾，保存溫度維持在4℃。

4.根據(jù)權利要求1所述的哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，根據(jù)步驟S3：采用5周齡BALB/c Nude免疫缺陷鼠，且免疫缺陷鼠體重14-16g，陰囊處做0.5cm切口。

5.根據(jù)權利要求1所述的哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，根據(jù)步驟S4：采用的睪丸組織于37℃水浴鍋中復蘇，并剪切成1-2mm³的組織小塊。

6.根據(jù)權利要求1所述的哺乳動物凍存睪丸組織異種異位移植模型的構建方法，其特征在于，根據(jù)步驟S5：脊柱兩側分別做3個3mm切口，每個切口注射30μL基質(zhì)膠。