[發明專利]一種檢測MYH7基因突變的引物探針組合物及其應用

有效

• 申請號: 202110402356.8
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN112941175B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 趙躍;王玉鑫
• 申請（專利權）人: 大理大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種檢測MYH7基因突變的引物探針組合物及其應用，所述檢測MYH7基因突變的引物探針組合物包括檢測MYH7基因突變位點c.2652GT的實時熒光PCR引物和探針；所述實時熒光PCR引物包括SEQ IDNo.1～2所示的核苷酸序列；所述探針包括野生型MYH7的探針和突變型MYH7的探針；所述野生型MYH7的探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述突變型MYH7的探針包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；所述探針為Taqman探針，所述Taqman探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有淬滅基團。所述引物探針組合物靈敏性高，特異性好，應用價值高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種檢測MYH7基因突變的引物探針組合物及其應用。

背景技術

肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy，HCM)是一種最常見的遺傳性心臟疾病，主要表現為左心室或雙心室不對稱性肥厚，少數患者表現為左心室流出道梗阻，主要病理特征為心肌細胞彌漫性肥大、畸形、核大、深染及心肌纖維紊亂等。HCM臨床表現為從無征兆逐漸發展至呼吸困難、暈厥、胸痛甚至引發心源性猝死和致命性心律失常。

HCM的致病基因主要包括肌節蛋白基因和能量代謝基因，這些基因突變后最終導致心肌細胞供能不足、心臟結構功能受損以及部分心肌細胞死亡，不能完成正常的生理過程，最終發生肥厚型心肌病。心臟肌節主要包括粗肌絲和細肌絲，肌節基因相關位點的突變，破壞了肌球蛋白和肌動蛋白之間的肌絲滑動，改變了心肌細胞內的鈣信號通路，影響了左心室的發育和心肌壁的結構，最終導致心臟的功能不全。MYH7是HCM的最主要致病基因之一，位于染色體14q11.2～q12，全長29.924kb，共40個外顯子，編碼1935個氨基酸，其主要遵循常染色體顯性遺傳模式，部分HCM患者也表現為常染色體隱性或性染色體遺傳。該基因高表達于心肌組織，編碼β-肌球蛋白重鏈，其突變后，對Ca²⁺的親和力和敏感性加強，刺激Ca²⁺的釋放異常，增加了肌節之間的滑行，使心肌細胞排列紊亂及產生代償性肥厚，最終導致HCM的發生。

基因突變的研究已成為當今生命科學領域研究的熱點之一，在這樣的背景下，其檢測技術也得到了飛速的發展。目前，遺傳疾病基因突變的檢測方法較多，如：限制性片段長度多態性、等位基因特異PCR擴增、單鏈構象多態性、高分辨率溶解曲線分析、PCR擴增直接進行毛細管電泳測序和高通量測序等，上述方法各有優缺點。CN102965428A公開了一種檢測遺傳性心肌肥厚相關基因突變樣品制備試劑盒，該試劑盒采用探針捕獲后，再進行測序的方法，針對多個基因的多個變異位點進行檢測，但過程十分繁瑣，耗時較長，且價格十分昂貴，限制了相關產品的使用與推廣。

引起HCM發病的突變位點較多，早期分子檢測和預防尤為關鍵。因此，如何建立一種簡便、快速、經濟和準確的HCM基因突變篩查方法，為HCM的預防、輔助臨床診斷和預后評估提供技術支持，已成為亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供一種檢測MYH7基因突變的引物探針組合物及其應用，使用不同的熒光報告基團分別對野生型MYH7的探針和突變型MYH7的探針進行標記，再結合質控品的檢測結果，可以對MYH7基因的新突變位點c.2652GT的突變情況進行檢測，結果準確，操作簡單，應用價值極高。

為達此目的，本發明采用如下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種檢測MYH7基因突變的引物探針組合物，所述檢測MYH7基因突變的引物探針組合物包括檢測MYH7基因突變位點c.2652GT的實時熒光PCR引物和探針；

所述實時熒光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列；

所述探針包括野生型MYH7的探針和突變型MYH7的探針；