[發(fā)明專利]一種同時識別殺螟硫磷及甲基對硫磷的納米抗體制備及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110401838.1
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113307877B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐振林;何曉婷;陳子鍵;王弘;張譯豐;羅林;沈玉棟;雷紅濤;肖治理
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/543;C12R1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發(fā)明公開了一種同時識別殺螟硫磷及甲基對硫磷的納米抗體制備及應(yīng)用。該納米抗體，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼所述納米抗體的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。本發(fā)明所公開的納米抗體可以應(yīng)用于殺螟硫磷與甲基對硫磷殘留的實(shí)際樣品檢測，該納米抗體具有較高的熱穩(wěn)定性、較高的有機(jī)耐受性及耐弱酸性等特點(diǎn)，可提高殺螟硫磷與甲基對硫磷免疫檢測的靈敏度，且操作簡單、所耗時間較短。本發(fā)明制備納米抗體的方法具有普遍適用性，可用于其他小分子物質(zhì)納米抗體的篩選和制備，具有很高的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時識別殺螟硫磷及甲基對硫磷的納米抗體制備及應(yīng)用。

背景技術(shù)

殺螟硫磷(Fenitrothion)又稱殺螟松，是一種廣泛使用的有機(jī)磷農(nóng)藥。殺螟硫磷具有較好的觸殺與胃毒作用，可防治半翅目、鞘翅目等害蟲，常用于玉米、水稻、大豆及蔬菜上的害蟲防治。殺螟硫磷具有中等毒性，不合理施用殺螟硫磷會導(dǎo)致殺螟硫磷在作物上殘留積累，過量攝入對人畜具有一定毒害作用：導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)中的單鍵積累，引發(fā)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、昏迷等癥狀，急性中毒還可危及生命。

對農(nóng)作物中殘留的殺螟硫磷進(jìn)行準(zhǔn)確檢測是避免殺螟硫磷對人畜健康造成損傷的重要手段。目前國家標(biāo)準(zhǔn)中對殺螟硫磷的檢測方法仍為儀器分析方法，如色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的檢測方法等。此類檢測方法靈敏度和準(zhǔn)確度高，但是需要昂貴的設(shè)備和試劑以及專業(yè)的操作人員，此外還需要經(jīng)過復(fù)雜的制樣過程，其耗費(fèi)的時間和成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足目前市場對大量農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行篩查的需要。

免疫分析方法是近年來發(fā)展起來的一種基于抗體特異性識別抗原分子并通過信號分子釋放出的信號強(qiáng)度反映待測物含量的分析方法。免疫分析方法的特點(diǎn)是能夠特異性的識別一種或一類目標(biāo)分析物，靈敏度高，相較儀器分析方法而言所需設(shè)備簡單，對操作人員專業(yè)要求低，檢測時間短，有的免疫分析方法甚至能夠在幾分鐘內(nèi)對待測樣品進(jìn)行半定量或定量分析。常用的免疫分析方法有酶聯(lián)免疫分析法、側(cè)流免疫分析法、熒光免疫分析法、電化學(xué)免疫分析法等。免疫分析方法成功的關(guān)鍵在于制備靈敏度高特異性強(qiáng)的抗體。由于抗體的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，因此免疫分析法必須在溫和的條件下(合適的濃度的鹽離子溶液、接近37℃的環(huán)境、偏中性的pH值、低濃度的有機(jī)溶劑等)進(jìn)行，且需要避免免疫制劑在保存和運(yùn)輸過程中失活，影響其檢測活性。

納米抗體是一種新型的抗體制劑。1993年比利時科學(xué)家在羊駝科動物身上發(fā)現(xiàn)了天然缺失輕鏈的重鏈抗體。后來人們通過基因工程技術(shù)表達(dá)出這種重鏈抗體的抗原結(jié)合區(qū)，這種單個結(jié)構(gòu)域的重鏈抗體片段是目前人們通過基因工程手段制備出的具有抗原識別與結(jié)合能力的最小抗體片段，其分子量大小只有15kD左右，僅為傳統(tǒng)抗體的十分之一左右，其尺寸處于納米級別，故又稱為“納米抗體”。

在納米抗體應(yīng)用的過程中，人們發(fā)現(xiàn)了納米抗體具有一些有別于傳統(tǒng)抗體的性質(zhì)，其中最典型的是納米抗體能夠在高溫處理后以及在一定濃度的有機(jī)溶中仍保留著較高的抗原結(jié)合能力，這些性質(zhì)可以使樣品前處理過程得到一定簡化，使得免疫分析法更加能滿足市場對快檢的需求。

中國專利：殺螟硫磷半抗原、人工抗原、特異性抗體及其用途 (CN101012239B)中提供了一種利用人工殺螟硫磷抗體，通過間接ELISA法、直接ELISA法用于檢測殺螟硫磷的技術(shù)方案。由該中國專利的說明書可知，該專利在通過間接ELISA法檢測殺螟硫磷時，IC₅₀＝13μg/L，說明目前針對殺螟硫磷的超高靈敏度的檢測方法還未被提供。并且現(xiàn)有技術(shù)中也未提供過同時檢測殺螟硫磷和甲基對硫磷的高特異性、靈敏度的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種殺螟硫磷與甲基對硫磷的納米抗體及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個目的是提供一種抗殺螟硫磷與甲基對硫磷的納米抗體sm5。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種編碼所述納米抗體sm5的基因。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種重組載體。