[發明專利]一種用于口腔脫落細胞直接PCR擴增的預處理方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110401322.7
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113171136A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 黃迅威;畢萬里;王志峰;袁利濱
• 申請（專利權）人: 蘇州新海生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61B10/02
• 分類號: A61B10/02;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 吳溪;張廣育

本發明提供了一種對口腔樣本直接進行PCR擴增的方法，所述方法包括：(1)使用一種口腔采樣拭子進行樣本采集；和(2)直接以所獲得的樣本作為模板進行PCR擴增；所述口腔采樣拭子包括手柄和采樣拭子頭，所述采樣拭子頭包括采樣頭本體，以及所述采樣頭本體上的用于增加表面積的凸起和/或凹陷，其中所述采樣頭本體和所述凸起和/或凹陷的外表未覆蓋其他材料。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及一種可對口腔脫落細胞直接進行PCR擴增的預處理方法及試劑盒。

背景技術

對于分子診斷，最常用的臨床檢測方法是熒光定量PCR法。PCR(Polymerase ChainReaction，聚合酶鏈式反應)是一種在生物體外放大擴增特定DNA(deoxyribonucleicacid，脫氧核糖核酸)片段的技術。PCR在擴增DNA時一般需要經過高溫解鏈反應、退火反應及延伸反應三個步驟，經過上述三個步驟后初始DNA分子數量增加一倍，此時為一個循環；倍增后的DNA分子繼而成為下一個循環的模板，如此循環倍增下去，經過30-40個循環后，DNA分子數目將放大至初始值的近10⁹-10¹⁰倍。由此，針對于分析和檢驗的目的，PCR能夠將作為分析物的DNA分子進行特異性的大規模放大，因此，PCR技術能夠用于傳染病、遺傳性疾病及腫瘤等的早期診斷，同時，產前檢查及法醫鑒定中得到越來越廣泛的應用。基于PCR技術的分子檢測方法通常需要經歷樣本處理、核酸提取以及PCR反應體系構建、PCR擴增反應以及信號檢測等過程。

熒光定量PCR方法一般分為探針法和染料法。探針法是PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴增時，Taq酶的5'端-3'端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。染料法是使用能與核酸進行結合的熒光染料。這些染料可以結合到雙鏈DNA上面，當體系中的模板被擴增時，熒光染料可以有效結合到新合成的雙鏈上面，隨著PCR的進行，結合的熒光染料越來越多，被儀器檢測到的熒光信號越來越強，從而達到定量的目的。

PCR反應需要模板，常規的口腔脫落細胞模板對樣本進行提取后獲得的。樣本的提取過程大多數繁瑣費時，有研究者通過配方調整，實現了簡易提取。但是由于簡易提取并不能完全去除樣本中抑制PCR反應的雜質，因此檢出率偏低。

此外，對于目前經常使用的采樣工具，如棉拭子、植絨拭子等，在采樣過程中會采集到大量的無用蛋白和雜質，影響樣本質量。如果使用這樣的采樣工具，由于樣本雜質過多，至少需要簡易的樣本處理過程。

因此，仍然迫切需要更有效的采樣工具以及更簡單易行的方法，來進行PCR檢測。

發明內容

第一方面，本發明提供了一種口腔樣本采集的方法，所述方法包括使用一種口腔采樣拭子進行樣本采集，所述口腔采樣拭子包括手柄和采樣拭子頭，所述采樣拭子頭包括采樣頭本體，以及所述采樣頭本體上的用于增加表面積的凸起和/或凹陷，其中所述采樣頭本體和所述凸起和/或凹陷的外表未覆蓋其他材料。

第二方面，本發明提供了一種對口腔樣本直接進行PCR擴增的方法，所述方法包括：(1)使用一種口腔采樣拭子進行樣本采集；和(2)直接以所獲得的樣本作為模板進行PCR擴增；其中所述口腔采樣拭子包括手柄和采樣拭子頭，所述采樣拭子頭包括采樣頭本體，以及所述采樣頭本體上的用于增加表面積的凸起和/或凹陷，其中所述采樣頭本體和所述凸起和/或凹陷的外表未覆蓋其他材料。