[發(fā)明專利]一種重組阪崎克羅諾桿菌及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110400775.8
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113073075A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王小元;陳閃閃;王建莉;陳思;胡曉清
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/61;C12N9/90;C12P19/04;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發(fā)明公開了一種重組阪崎克羅諾桿菌及其應(yīng)用，屬于遺傳工程領(lǐng)域。本發(fā)明通過基因工程構(gòu)建一株C.sakazakii ATCC BAA?894ΔRS18960的阪崎桿菌。該菌株與野生型菌株相比，對新生霉素的敏感性提高了16倍，對克拉霉素的敏感性提高了2倍，對利福平的敏感性提高了4倍，且菌株無任何抗性標(biāo)記，遺傳背景清晰，生長狀況良好，這為防治阪崎桿菌的食品污染問題提供了新的方向，為研究阪崎桿菌對抗生素的耐藥性提供了指導(dǎo)意義，為研究抗生素在革蘭氏陰性菌中的作用機(jī)制具有參考價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組阪崎克羅諾桿菌及其應(yīng)用，屬于基因工程和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細(xì)菌耐藥性是指細(xì)菌對抗菌藥物不敏感的現(xiàn)象，是細(xì)菌自身生存過程中的一種特殊表現(xiàn)形式。細(xì)菌耐藥性可分為固有耐藥性和獲得性耐藥性。固有耐藥性又稱天然耐藥性，是由于細(xì)菌結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成的不同，本身對抗菌藥物不敏感，如鏈球菌對氨基糖苷類抗生素天然耐藥，天然耐藥性是由細(xì)菌染色體基因決定，代代相傳，不會改變；獲得性耐藥性是由于細(xì)菌與抗菌藥物接觸后，由質(zhì)粒介導(dǎo)，通過改變自身的代謝途徑，使其不被抗菌藥物殺滅。如金黃色葡萄球菌與淋球菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶而對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥。獲得性耐藥性可由質(zhì)粒將耐藥基因轉(zhuǎn)移給染色體而遺傳后代，成為固有耐藥性，也可因不再接觸抗菌藥物而消失。

而目前致病菌株對于抗生素的耐藥性屬于獲得性耐藥性，由于耐藥性的存在，導(dǎo)致致病菌株對抗生素不敏感，在疾病的治療過程中需要頻繁的更換抗生素。

阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)，是一種新興的食源性條件致病菌，屬于革蘭氏陰性菌的一種，一直被認(rèn)為屬于黃色陰溝腸桿菌屬。研究發(fā)現(xiàn)，C.sakazakii主要存在于嬰兒奶粉中，引起新生兒疾病，幸存者面臨毀滅性的神經(jīng)后遺癥，包括腦積水、四肢癱瘓和神經(jīng)發(fā)育遲緩等。與大腸桿菌相類似，C.sakazakii具有相似的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，也具有類似的脂多糖結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)對細(xì)胞的損傷修復(fù)以及提高其在惡劣環(huán)境下的生存能力十分必要。研究發(fā)現(xiàn)，C.sakazakii對環(huán)境脅迫的抵抗力強(qiáng)于其他腸桿菌科，且對多種抗生素均存在一定的耐藥性。因此，如何能夠改善阪崎克羅諾桿菌的耐藥性，對于醫(yī)學(xué)的研究具有重大的意義。

新生霉素的作用原理是抑制脫氧核糖核酸和核糖核酸的合成造成細(xì)胞死亡。克拉霉素的作用原理是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,其作用是與核糖體上的23S rRNA相結(jié)合,通過干擾蛋白質(zhì)的合成達(dá)到殺菌作用，利福平的作用機(jī)制是與依賴DNA的RNA多聚酶的β亞單位結(jié)合，阻止該酶與DNA連接，從而阻斷RNA轉(zhuǎn)錄過程，使DNA與蛋白質(zhì)的合成停止。阪崎桿菌對這幾種抗生素均有較強(qiáng)的耐藥性，因此，如何降低阪崎桿菌對抗生素的耐藥性的研究對于新藥的研發(fā)具有重要的作用。

脂多糖分子的Kdo₂-lipid A基團(tuán)是構(gòu)成其外膜外層的主要成分。一些細(xì)菌通過修飾其脂多糖分子的Kdo₂-lipid A基團(tuán)來適應(yīng)新的生存環(huán)境。Kdo₂-lipid A在細(xì)胞內(nèi)膜內(nèi)層合成，被連上核心糖并翻轉(zhuǎn)到內(nèi)膜外層，再連上O-抗原重復(fù)單元，形成脂多糖分子。Kdo₂-lipid A可以通過TLR4受體激活先天性免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致Kdo₂-lipid A和類脂A廣泛用于動物免疫實(shí)驗(yàn)，研究致病菌株的Kdo₂-lipid A結(jié)構(gòu)，更有助于理解致病菌株的致病機(jī)理。因此，如何得到一種Kdo₂-lipid A的生產(chǎn)方法，成為研究的熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題；

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種能夠改善阪崎桿菌對抗生素耐藥性的方法，以及提供一種對抗生素敏感的重組阪崎克羅諾桿菌，同時提供一種生產(chǎn)Kdo₂-lipid A的方法。

技術(shù)方案

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重組阪崎克羅諾桿菌，所述重組阪崎克羅諾桿菌敲除了編碼甘露庚糖差向異構(gòu)酶的基因ESA_RS18960。