[發明專利]一種特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法

有效

• 申請號: 202110399809.6
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113156035B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 王小妹;溫愷嘉;張聚洋;黃曉玲;袁誠;許文東;李菁;李詠華;林元亨;武林賀;盧嘉頡;劉菊妍
• 申請（專利權）人: 廣州白云山漢方現代藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 彭妙玲;周增元

1.一種特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，以體積比為7~9:1~3的乙腈-異丙醇混合溶劑為流動相A，乙腈為流動相B，采用常規C₁₈分析柱進行梯度洗脫，測定全反式維生素A含量；

所述梯度洗脫的具體操作為：在0~2min，所述流動相A與所述流動相B的初始體積比為0:100；在2~42min，所述流動相A與所述流動相B的體積比由0:100，線性勻速變化至30:70；42~52min，所述流動相A與所述流動相B的體積比保持30:70；52~54min，所述流動相A與所述流動相B的體積比由30:70，線性勻速變化至0:100；54~62min，所述流動相A與所述流動相B的體積比保持0:100；

所述梯度洗脫前進行試樣溶液制備，具體為：稱取試樣，置于具塞試管中，加入正已烷，第一次渦旋振蕩提取，加入無水乙醇，第二次渦旋振蕩提取，混合均勻，取出，打開塞子放氣，立即密塞，靜置至完全分層；吸取上清液，進行氮吹干，留下遺留物，加入異丙醇溶解所述遺留物，得到試樣溶液。

2.如權利要求1所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，以體積比為8:2的乙腈-異丙醇混合溶劑為所述流動相A，乙腈為所述流動相B，進行所述梯度洗脫。

3.如權利要求1所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的檢測波長為325nm，流速為2.0mL/min，進樣體積為20μL，柱溫為20~33℃。

4.如權利要求1所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，吸取所述上清液的量為正已烷加入量的四分之一，所述氮吹干的溫度條件為40℃以下，所述異丙醇的加入量與所述試樣的體積質量比為2ml：10g。

5.如權利要求4所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，所述試樣與所述正已烷的質量體積比為10g：15~25ml；所述試樣與所述無水乙醇的質量體積比為10g：15~30 ml；振蕩為渦旋振蕩器振蕩，速度為1800~2200r/min，第一次渦旋振蕩提取的時間為4~6min，第二次渦旋振蕩提取的時間為2~4min。

6.如權利要求1所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，所述梯度洗脫后，記錄色譜圖，根據全反式維生素A棕櫚酸酯對照品的保留時間進行定性，由標準曲線求得試樣溶液中全反式維生素A棕櫚酸酯的濃度，按下式計算出反式維生素A含量：

式中：

X——試樣中反式維生素A含量，單位為微克每百克（μg/100g）；

ρ— —試樣溶液中全反式維生素A棕櫚酸酯的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V — —樣品稀釋倍數；

m——試樣質量，單位為克（g）；

100——換算百分率系數；

0.5455——轉換因子。

7.如權利要求6所述特殊醫學用途配方食品中全反式維生素A含量測定的方法，其特征在于，所述標準曲線由標準曲線液在相同條件下梯度洗脫獲得，所述標準曲線液的制備包括：

A、精密稱取全反式維生素A棕櫚酸酯對照品10mg，用異丙醇溶解定容至50mL，得濃度為200μg/mL的標準儲備液；

B、精密吸取所述標準儲備液1.0mL，加異丙醇稀釋至20mL，制得濃度為10μg/mL的對照液，作為標準曲線液Ⅴ；

C、精密吸取所述標準曲線液Ⅴ2.0mL，加異丙醇稀釋至5mL，制得濃度為4μg/mL的對照液，作為標準曲線液Ⅳ；

D、精密吸取所述標準曲線液Ⅴ2.0mL，加異丙醇稀釋至10mL，制得濃度為2μg/mL的對照液，作為標準曲線液Ⅲ；

E、精密吸取所述標準曲線液Ⅴ2.0mL，加異丙醇稀釋至20mL，制得濃度為1μg/mL的對照液，作為標準曲線液Ⅱ；

F、精密吸取所述標準曲線液Ⅴ2.0mL，加異丙醇稀釋至50mL，制得濃度為0.4μg/mL的對照液，作為標準曲線液Ⅰ。