[發明專利]一種銅綠假單胞菌及其篩選方法與應用

有效

• 申請號: 202110399217.4
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113151077B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 黃雪嬌;鐵文周;王明釋;蔣代華;農小芳
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;C12R1/385;C02F101/16
• 代理公司: 重慶敏創專利代理事務所(普通合伙) 50253
• 代理人: 陳千

本發明涉及微生物技術，具體涉及一種銅綠假單胞菌及其篩選方法與應用，所獲得的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，命名為Yong5，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為GDMCC No.61575，保藏地址為廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，保藏日期為2021年3月23日。該菌株篩選容易，能15℃低溫條件高效去除水體中的亞硝態氮，去除率高達90％以上，且幾乎無中間產物硝態氮和氨態氮的積累，不產生二次污染，對低溫水體中亞硝態氮的去除具有良好的應用前景，能很好的應用于養殖水體的微生物修復方案中。

技術領域

本發明涉及微生物技術，具體涉及一種銅綠假單胞菌及其篩選方法與應用。

背景技術

隨著集約化養殖的迅速發展，池塘老化、放養密度過高以及投飼料殘餌過多等諸多因素引起了養殖水體中亞硝酸鹽逐年升高，導致魚蝦出現組織缺氧，發生病變，甚至死亡，所以亞硝態氮含量過高是水體受污染的重要原因之一?；趤喯跛猁}的危害，為保障水產養殖的安全，需要采取有效方法將亞硝酸鹽濃度控制在0.2mg/L以下。

微生物修復技術可通過微生物的同化和反硝化過程有效去除污水中的亞硝酸鹽。中國專利200910273046.X公布了一株施氏假單胞菌(Pseudomonas stutzeri)YZN-001(保藏號為CCTCC NO:M209107)，培養溫度30℃，18h后對初始濃度為197.82mg/L的亞硝態氮去除率為100％；中國專利201010506931.0公布了一株假單胞菌(Pseudomonas sp.)(保藏號為CCTCC M20100209)，培養溫度30℃，24h后對初始濃度為100mg/L的亞硝態氮去除率為17.35％；中國專利201210512246.8公布了一株產酸克雷伯氏桿菌(Klebsiella oxytoca)DF-1(保藏號為CCTCC No.6623)，在35℃時對初始濃度為10mg/L的亞硝態氮去除率高達90％以上，但培養溫度為15℃對10mg/L亞硝態氮的去除率僅為20％左右；中國專利201710812319.8公布了一株假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)DN13-01，培養溫度28℃，12h后對初始濃度為14mg/L的亞硝態氮去除率為100％。

綜上可以看出，目前已發現的可去除亞硝酸鹽的菌都均是在常溫下進行的，尚未有關于可在低溫條件下高效去除亞硝酸鹽的菌株報道。

發明內容

基于上述缺陷，本發明的首要目的在于獲得一株能夠在低溫條件下去除水體亞硝態氮的細菌，且在處理過程中幾乎不積累硝態氮與氨態氮，對環境不會造成二次污染。

具體而言，本發明得到一種銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，該菌株命名為Yong5，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為GDMCC No.61575,保藏地址為廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，保藏日期為2021年3月23日。

本發明的第二目的在于如何更好實現上述菌株的篩選，具體而言，提出了一種銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的篩選方法，其關鍵在于包括以下步驟：

S1：取10g土樣加入到預先裝有10顆玻璃珠的10％的無菌磷酸緩存鹽溶液中,在25℃、200r/min振蕩30min，靜置5min，收集土壤懸液；

S2：將收集的懸浮液于5000r/min條件下離心15min，收集上清液10mL于4℃冰箱保存備用；

S3：取2mL制備好的樣品加入到100mL含亞硝態氮濃度為100mg/L的液體培養基中進行篩選培養，25℃、180r/min震蕩培養48h；

S4：5％的接種量繼代培養4次后，用梯度稀釋法制備10²～10⁶系列的稀釋液，取100μL分別涂布到BTB固體培養基中培養；