[發(fā)明專利]一種毛細(xì)管高度指示劑裝置及其檢測(cè)硫化氫的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110396237.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113092309B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅芳;陳舒婷;付才力;林振宇;郭隆華;邱彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N7/18
• 分類號(hào): G01N7/18
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種毛細(xì)管高度指示劑裝置的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）制備鉑納米顆粒PtNPs，并在含有60 μg/mL鏈霉親和素的0.1 M，pH 7.5 H₃BO₃溶液中重新懸浮，在37℃下孵育1 h，添加10 wt% BSA溶液，在37℃下繼續(xù)孵育1h，離心后，將反應(yīng)物產(chǎn)物重懸于含有0.1wt% BSA的0.1M，pH 7.5 H₃BO₃溶液中，獲得鏈霉親和素修飾的鉑納米顆粒溶液；

（2）將兩端各修飾有生物素和炔基的DNA溶液添加至步驟（1）制備的鉑納米顆粒溶液中孵育，體積比為2:5，獲得炔基-DNA修飾的鉑納米粒子Alk-PtNPs；

（3）將鏈霉親和素磁珠分散于PBS緩沖溶液中，加入兩端修飾有生物素和疊氮基團(tuán)的DNA溶液，進(jìn)行反應(yīng)，制備獲得1mg/mL的疊氮基修飾的磁珠N₃-MBs溶液；

（4）向步驟（3）制備的疊氮基修飾的磁珠N₃-MBs溶液中加入檢測(cè)樣品，在室溫下反應(yīng)，然后向混合溶液中加入Alk-PtNPs溶液、抗壞血酸溶液、硫酸銅溶液、PBS緩沖溶液，形成檢測(cè)體系；

（5）將步驟（4）獲得的檢測(cè)體系立即轉(zhuǎn)移到裝有過(guò)氧化氫溶液的玻璃小瓶，立即旋上裝有毛細(xì)管指示劑的硅膠蓋，對(duì)毛細(xì)管上升的高度進(jìn)行測(cè)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）所述鉑納米顆粒的制備方法為：將1 mM H₂PtCl₆溶液加熱到80℃保持20 min，然后添加0.4 M抗壞血酸溶液并攪拌均勻，并在80℃繼續(xù)保持30 min，取1mL溶液離心過(guò)濾獲得鉑納米顆粒；H₂PtCl₆溶液與抗壞血酸溶液比例體積比為25:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）所述修飾有生物素和炔基的DNA為：5’-CHCH-TGTCCGTAGCTAAAAAAAAAAAAA-Bio-3’，DNA溶液的濃度為10 μmol/L，所述孵育的溫度為37 ℃，時(shí)間為2小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（3）所述兩端修飾有生物素和疊氮基團(tuán)的DNA為5’-Bio-AAAAAAAAAAAATCACAGATGAGTAGT-azido-3’，溶液的濃度為10 μM，所述反應(yīng)的溫度為37 ℃，時(shí)間為2 小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（4）所述檢測(cè)體系中，N₃-MBs溶液的濃度為0.5 mg/mL，Alk-PtNPs溶液濃度0.06 μmol/L，抗壞血酸鈉溶液濃度為10 mmol/L，硫酸銅溶液濃度為200 μmol/L，PBS緩沖液濃度為0.01 mol/L；所述N₃-MBs溶液：硫化氫溶液：Alk-PtNPs溶液：抗壞血酸溶液：硫酸銅溶液：PBS緩沖溶液的體積比為10:50:10:3:1:3。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（5）中過(guò)氧化氫溶液為30 wt%。

7.權(quán)利要求1-6任一所述的方法制備獲得的一種毛細(xì)管高度指示劑裝置。

8.權(quán)利要求7所述的毛細(xì)管高度指示劑裝置在檢測(cè)硫化氫中的應(yīng)用。