[發明專利]一種基于Au@Pt酶的免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202110394138.4
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN113325179A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 王杰;劉振江;陳琳;王靜;黃斌;馮永新
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所(中國煙草總公司青州煙草研究所);河北中煙工業有限責任公司;湖北省食品質量安全監督檢驗研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/53;B01J23/52
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 耿鵬

本發明公開了一種基于Au@Pt酶的免疫層析試紙條及其制備方法,包括以下步驟：S1：制備Au@Pt標記單克隆抗體的溶液，Au@Pt標記單克隆抗體為Au@Pt?mAb；S2:在硝酸纖維素膜上制備檢測線T線和控制線C線；S3:將S2中的硝酸纖維素膜與樣品墊玻、結合墊和吸水墊組裝成整條試紙，然后將組裝好的試紙切成試紙條。簡便、靈敏、快速、實時的免疫層析法檢測谷物中的嘔吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)，利用Au@Pt酶本身黑色的特性，實現了對嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮(ZEN)的可視化檢測。

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域。更具體地，涉及一種基于Au@Pt酶的免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

嘔吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)廣泛存在于谷物糧食及環境水體中，具有很強的毒性，對人體構成極大的威脅以及對農作物產量、水體環境均有不同程度的影響。因此建立簡便、快速、靈敏的檢測方法同時檢測這兩種毒素具有重要意義。

傳統的膠體金免疫層析試紙條主要利用了金顆粒獨有的顏色特性實現定性或半定量的檢測。此方法具備方便快速，成本低，應用范圍廣等特點。然而金納米顆粒在檢測的過程中容易受到環境因素的影響，如在強酸、強堿和鹽濃度高的環境中容易聚集沉淀，影響檢測結果。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服上述現有技術的缺陷和不足，開發一種簡便、靈敏、快速、實時的免疫層析法檢測谷物中的嘔吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)，利用Au@Pt酶本身黑色的特性，實現了對嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮(ZEN)的可視化檢測。

本發明的目的是提供一種基于Au@Pt的側流免疫層析試紙條制備方法,包括以下步驟：

S1：制備Au@Pt標記單克隆抗體的溶液，Au@Pt標記單克隆抗體為Au@Pt-mAb；

S2:在硝酸纖維素膜上制備檢測線T線和控制線C線；

S3:將S2中的硝酸纖維素膜與樣品墊玻、結合墊和吸水墊組裝成整條試紙，然后將組裝好的試紙切成試紙條。

在本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，步驟S1包括：

S11先制備Au@Pt納米酶溶液；

S12取兩個離心管，分別加入1mLS101中制備的Au@Pt納米酶溶液，然后0.2mol/L的K₂CO₃溶液調節膠體金溶液至pH 8.5左右；

S13在兩個離心管中分別加入1.3μL 1mg/mL的DON單克隆抗體、2.3μL 0.5mg/mL的ZEN單克隆抗體，室溫下反應30min，使抗體標記在膠體金顆粒上；

S14向離心管中各加入牛血清白蛋白溶液，封閉30min，離心去除上清液；

S15將S104中獲得的沉淀液重溶于Tris緩沖液，分別得到穩定的Au@Pt標記的DON單克隆抗體和Au@Pt標記的ZEN單克隆抗體。

在本發明的一個較佳實施例中，進一步包括，步驟S11制備Au@Pt納米酶溶液的步驟包括：

S111取3mL的K₂PtCl₆和3mL的HAuCl₄·4H₂O于酸化后的玻璃瓶中,稱取0.06g的Pluronic F127加入混合溶液中，并超聲溶解；

S112在超聲狀態下加入6mL的抗壞血酸，繼續超聲反應15min,超聲完成后置于磁力攪拌器上，室溫攪拌20-24h；

S113將獲得的產物10000rpm下離心20min，除去多余的Pluronic F127，并加入丙酮和水進行反復洗滌，洗滌4次，最后加入雙蒸水并超聲分散，獲得Au@Pt納米酶溶液。