[發明專利]一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法

在審

• 申請號: 202110393667.2
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113005135A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 翁炳煥
• 申請（專利權）人: 翁炳煥
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N15/66;C12N15/57;C12N15/56;C12N11/10;C12N11/04;A23C9/123
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1.一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，包括：(1)敲除益生發酵菌嗜酸乳桿菌的半乳糖苷酶基因，構建以半乳糖苷酶為篩選標記的半乳糖苷酶缺陷型嗜酸乳桿菌突變株；(2)將乳酸菌質粒的復制子、啟動子、半乳糖苷酶基因以及合成的多克隆位點克隆至基因載體，構建半乳糖苷酶互補型載體；(3)根據GenBank人ACE2 mRNA序列設計引物，添加酶切位點，經PCR擴增獲得ACE2基因，進而經酶切和連接將ACE2基因克隆至半乳糖苷酶互補型載體，獲得同時表達ACE2基因和半乳糖苷酶基因的重組載體；(4)將所述重組載體轉化突變株，獲得雙表達ACE2和半乳糖苷酶的無抗生素抗性基因的重組嗜酸乳桿菌；(5)將重組嗜酸乳桿菌包被成抵抗胃液的微膠囊；(6)以重組嗜酸乳桿菌或重組嗜酸乳桿菌微膠囊替代現有技術的嗜酸乳桿菌發酵菌，配制抗冠狀病毒感染的發酵乳制品；(7)食用發酵乳制品后，其中的重組嗜酸乳桿菌定植于腸道繁殖，并持續表達ACE2蛋白，隨后ACE2蛋白刺激宿主產生抗-ACE2，其中ACE2蛋白起封閉冠狀病毒受體結合區S1-RBD的作用，抗-ACE2起封閉宿主細胞表面冠狀病毒受體ACE2的作用，表達在益生菌表面的ACE2可與宿主細胞競爭吸附冠狀病毒，從而阻斷冠狀病毒通過S1-RBD與ACE2受體的結合而感染宿主。

2.根據權利要求1所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述益生發酵菌包括乳球菌、糞鏈球菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、拉曼乳桿菌、嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌、沙門氏菌、傷寒沙門氏菌Ty21a血清型變異株。

3.根據權利要求1、2所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述益生發酵菌或載體菌是指嗜酸乳桿菌。

4.根據權利要求1所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述載體包括細胞載體、納米載體、人工載體、pNZ8148、pLEISS、pMG36e、pBBR1MCS-5、pBBR1MCS-6、pRV610、pLEM415、pHY300PLK、NZ9000、MG1363、pBARGPE1、pNZ8149、pAN7-1、pBHt1、pVE5523、pPG611.1、pPG612.1、pMA5、pHCMC05、pGFP22、pGFP315、pHP13、pHP13-43、pHY-43、pWB980、pAOX1、MG1363、pNZ8148、NZ9000、pNZ9530、pMG36e、pKLAC1、GG799、pYD1、EBY100、pYES2、pYES2-flag、pYES2NTA、NTB、NTC、pYES3CT、pYIP5、pYRP7、pADH2、pRSH41、pDC315、pDF15、pUG6、pESC-His、BFD14、BFD15、pDNR1、p334、pDR195、pRS316，pRS316HA、YEplac112、YCplac33、YEplac195、YEpLac181、YIP211、pYX212、pYX212-VHB、pPG1或pPG2。

5.根據權利要求1、4所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述載體是指PMD-19-T、PUC-19、PBR322或pPlac。

6.根據權利要求1所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述乳制品包括酸奶、膠囊、片劑、粉劑、口服液、保健品。

7.根據權利要求1所述的一種預防冠狀病毒感染的益生酸奶及制備方法，其特征在于，所述重組嗜酸乳桿菌表達ACE2蛋白包括以S1-RBD基因和/或IL-10基因替換ACE2基因，然后與胞外錨定質粒或分泌型質粒構建重組質粒，進而轉化嗜酸乳桿菌益生菌，使重組S1-RBD和/或IL-10基因的益生菌持續表達S1-RBD和/或IL-10，起抗冠狀病毒感染作用。