[發明專利]一種快速檢測文物中動物膠原蛋白粘合劑的膠體金免疫層析試紙條的制備方法

在審

• 申請號: 202110393478.5
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN113063953A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 王秉;閆琳;馬維維;彭志勤;萬軍民
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

1.一種快速檢測文物中動物膠原蛋白粘合劑的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）取超聲后分散均勻的膠體金8-12ml，加入碳酸鉀溶液調節pH為8.0~9.0；

2）取牛膠原蛋白抗體用PBS緩沖液稀釋至濃度為10~20ug/ml；

3）將所得牛膠原蛋白抗體溶液以25-35滴/min的速度滴加至步驟1）所得膠體金溶液中，室溫勻速攪拌45~60min；

4）向步驟3）所得溶液中加入BSA溶液至其終濃度為0.3-0.5wt%，進行蛋白的封閉，繼續攪拌5-15min；

5）向步驟4）所得溶液中加入PEG-20000溶液至終濃度為0.15-0.25wt%，繼續攪拌5-15min；

6）將步驟5）所得溶液離心處理，棄上清液；

7）沉淀物用含0.8-1.2wt%BSA、0.03-0.05wt%疊氮鈉溶液的PBS緩沖液重懸進行防腐處理，冷藏備用；

8）用噴金劃膜機將步驟7）所得膠體金標記的抗體噴涂到金標墊上，制備金標墊；

9）用噴金劃膜機將牛膠原蛋白抗原和質控線抗體劃到硝酸纖維素膜上形成檢測線和質控線；

10）組裝成膠體金免疫層析試紙條。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述金免疫層析試紙條中，硝酸纖維素膜寬度為2.5~3.0cm；吸水墊的寬度為2.0~3.0cm，樣品墊寬度為1.5~2.0cm，金標墊的寬度為0.5~1.0cm。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述檢測線中牛膠原蛋白抗原的濃度為1~2mg/ml，膠體金標記的抗體濃度為15~30ug/ml，質控線中牛膠原蛋白抗體濃度為1~2mg/ml。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述PBS溶液的pH為pH=8.0。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟1）中，所述碳酸鉀溶液的濃度為0.08-0.12mol/L。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟4）中，所述BSA溶液的濃度為8-12wt%。

7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟5）中，所述PEG-20000溶液的濃度為8-12wt%。

8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟6）中，離心條件為12000~15000rpm，15~30min。