[發明專利]可特異性結合新型冠狀病毒核衣殼蛋白的多肽分子及制備方法

有效

• 申請號: 202110390701.0
• 申請日: 2021-04-12
• 公開（公告）號: CN112940081B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 萬蒙;何慶華
• 申請（專利權）人: 江西樂成生物醫療有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 何世磊

本發明提供了一種可特異性結合新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS?CoV?2)核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)的多肽分子及制備方法，涉及生物技術領域，該多肽分子的氨基酸序列為MQPMNALGGGAY。本發明采用優化的液相親和淘選方式，快速淘選獲得可特異性結合新型冠狀病毒核衣殼蛋白的多肽分子，所述的多肽分子與具傳統的抗體相比，具有優良的特異性，更好的酸堿耐受及熱穩定性，該多肽分子的獲得無需免疫過程、制備簡單、成本低、周期短，該多肽分子既可通過生物培養的方式大量擴增，也可以通過化學合成或者基因工程的方法進行大量制備，為新型冠狀病毒核衣殼蛋白特異性識別元件的制備提供了新的路徑，具有較好的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及可特異性結合新型冠狀病毒(SevereAcute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣殼蛋白(Nucleocapsidprotein,N蛋白)的多肽分子及制備方法。

背景技術

現有研究已證實，新型冠狀病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)是由新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)所導致。研究表明，新型冠狀病毒為正鏈單鏈RNA病毒，基因組長約30Kb，兩端為非編碼區，中間為非結構蛋白編碼區和結構蛋白編碼區。非結構蛋白編碼區主要包括開放讀碼框ORF1a和ORF1b基因，編碼16個非結構蛋白。結構蛋白編碼區主要編碼刺突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣殼蛋白。核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)序列保守程度高，在病毒復制過程中發揮重要作用。N蛋白與病毒RNA結合形成復合體，隨后在膜蛋白和包膜蛋白的共同作用下，包裹后進入病毒衣殼中。N蛋白是SARS-CoV-2含量最豐富的蛋白，能刺激機體產生高親和力的抗體。N蛋白可作為檢測抗原，用于COVID-19患者的血清抗體檢測。同理，檢測SARS-CoV-2病毒裂解后釋放出的N蛋白，也可作為判斷SARS-CoV-2病毒是否存在的一個依據。

現有技術未發現有關于可特異性結合新型冠狀病毒(Severe Acute RespiratorySyndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)的多肽分子的報導。

發明內容

本發明以新型冠狀病毒核衣殼蛋白為靶分子，將靶分子結合到酶標板載體上，投入噬菌體隨機展示十二肽庫，通過優化的親和淘選條件，獲得了一種可特異性結合新型冠狀病毒核衣殼蛋白的多肽分子，其氨基酸序列為：M-Q-P-M-N-A-L-G-G-G-A-Y。

上述多肽分子結構中，大寫英文字母分別代表已知天然L-型氨基酸殘基或其D-型異構體的一種，即M代表甲硫氨酸(蛋氨酸)殘基，Q代表谷氨酰胺殘基，P代表脯氨酸殘基，N代表天冬酰胺殘基，A代表丙氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，G代表甘氨酸殘基，Y代表酪氨酸殘基。

本發明還涉及編碼上述多肽分子氨基酸序列(MQPMNALGGGAY)的核苷酸，其序列為:ATG CAG CCT ATG AAT GCT TTG GGT GGT GGT GCT TAT。

本發明提及多肽分子可通過噬菌體擴增、化學合成或基因工程重組表達的方式進行大量制備。噬菌體擴增是指將展示有多肽分子的噬菌體，通過生物擴增的方式，大量繁殖生產展示有多肽分子的噬菌體粒子。化學合成是指依據公布的多肽氨基酸序列，通過化學合成多肽的方式進行多肽合成。基因工程重組表達的方式是指將編碼多肽分子的基因，通過克隆至表達載體，以多肽-融合蛋白的形式進行多肽分子的大量制備。

本發明的有益效果是：本發明所提及的多肽分子可替代傳統的新型冠狀病毒核衣殼蛋白抗體分子，該多肽分子具有特異性強、結構穩定性好、耐酸堿、耐高溫，制備簡單、快速等特點。