[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于自體或通用NK細(xì)胞體外培養(yǎng)的刺激細(xì)胞的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110388924.3
• 申請(qǐng)日: 2021-04-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115197907A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張進(jìn);裴端卿
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京和斯瑞生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/078
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/078;C12N5/0783;C12N5/0786;C12N5/0787;C12N13/00
• 代理公司: 北京力量專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種用于NK細(xì)胞體外培養(yǎng)的NK刺激細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述方法包括：將分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞直接進(jìn)行輻照獲得NK刺激細(xì)胞。

2.一種用于NK細(xì)胞體外培養(yǎng)的NK刺激細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述方法包括：將分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞加入含自體血清、rhIL2、rhIL15的無(wú)血清培養(yǎng)基中，培養(yǎng)獲得NK刺激細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將分離的外周血單核細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中，加入含自體血清、rhIL2、rhIL15和抗壞血酸的無(wú)血清培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)；

(2)每2-3天進(jìn)行補(bǔ)液：補(bǔ)充添加含自體血清、rhIL2、rhIL15的無(wú)血清培養(yǎng)基；

(3)繼續(xù)培養(yǎng)至7-14天，輻照處理培養(yǎng)體系，獲得NK刺激細(xì)胞；

其中，所述培養(yǎng)瓶為經(jīng)過(guò)TC處理且包被有人CD3單克隆抗體和人纖聯(lián)蛋白。

4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述培養(yǎng)體系中自體血清、rhIL2和rhIL15的終濃度分別為1-2％、200-1000IU和5-20ng/ml。

5.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述培養(yǎng)瓶中包被有人CD3單克隆抗體和人纖聯(lián)蛋白的濃度分別為100-500ng/ml和10-20μg/ml。

6.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，補(bǔ)液量為補(bǔ)液前培養(yǎng)體系總體積的50％-75％。

7.如權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述輻照劑量為5-20Gy。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述制備方法制備獲得的NK刺激細(xì)胞。

9.一種用于NK細(xì)胞體外培養(yǎng)的NK刺激細(xì)胞，其特征在于，所述NK刺激細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞；或所述NK刺激細(xì)胞包括25-60％的CD3⁺/CD56⁺細(xì)胞，0-3％的CD3^-CD56⁺細(xì)胞、40-75％的CD3⁺CD56^-細(xì)胞。

10.如權(quán)利要求8或9所述的NK刺激細(xì)胞用于自體或通用NK細(xì)胞體外培養(yǎng)中的應(yīng)用，其特征在于，所述方法為：將NK細(xì)胞與NK刺激細(xì)胞共同接種于NK細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，所述NK刺激細(xì)胞與NK細(xì)胞的濃度比為4：1-5：1。