[發明專利]鑒定馬鈴薯黑脛病菌的方法及其引物和探針

在審

• 申請號: 202110388415.0
• 申請日: 2021-04-12
• 公開（公告）號: CN112961927A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 楊秋夏;錢俊婷;易建平
• 申請（專利權）人: 上海海關動植物與食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.馬鈴薯黑脛病菌的特異性引物對，其特征在于，所述引物對由引物Ds4和引物Ds5組成；所述引物Ds4為SEQ ID No.1所示的單鏈DNA分子；所述引物Ds5為SEQ ID No.2所示的單鏈DNA分子。

2.鑒定或輔助鑒定馬鈴薯黑脛病菌的組合物，其特征在于，所述組合物由權利要求1所述的特異性引物對和馬鈴薯黑脛病菌特異性探針組成，所述馬鈴薯黑脛病菌特異性探針為P-Dsol，所述P-Dsol的核苷酸序列為SEQ ID No.3。

3.根據權利要求2所述的組合物，其特征在于，所述P-Dsol為TaqMan-MGB探針。

4.鑒定或輔助鑒定馬鈴薯黑脛病菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

A1)提取待測樣品基因組DNA；

A2)以所述基因組DNA為模板，用權利要求2所述的組合物進行實時熒光PCR反應；根據實時熒光PCR的擴增曲線確定待測樣品是否含有馬鈴薯黑脛病菌或對待測樣品中的馬鈴薯黑脛病菌進行定量檢測。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，根據實時熒光PCR的擴增曲線確定待測樣品是否含有馬鈴薯黑脛病菌的方法為：如果實時熒光PCR的擴增曲線為S型曲線確定待測樣品中含有馬鈴薯黑脛病菌或為馬鈴薯黑脛病菌；如果實時熒光PCR的擴增曲線不為S型曲線，確定待測樣品中不含有馬鈴薯黑脛病菌或不為馬鈴薯黑脛病菌。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于，步驟A2)所述實時熒光PCR反應程序為95℃預變性10s；95℃變性15s，60℃退火1min，40個循環。

7.鑒定或輔助鑒定馬鈴薯黑脛病菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

A1)提取待測樣品基因組DNA；

A2)以所述基因組DNA為模板，用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增得到PCR產物，檢測所述PCR產物的大小，如果所述PCR產物含有一個491bp的DNA片段，所述待測樣品中含有馬鈴薯黑脛病菌或所述待測樣品為馬鈴薯黑脛病菌；如果所述PCR產物不含有491bp的DNA片段，所述待測樣品中不含有馬鈴薯黑脛病菌或所述待測樣品不為馬鈴薯黑脛病菌。

8.權利要求1所述的特異性引物對或權利要求2或3所述的組合物在鑒定或輔助鑒定馬鈴薯黑脛病菌中的應用或在制備鑒定或輔助鑒定馬鈴薯黑脛病菌的產品中的應用。