[發明專利]一種藍莓內參基因及其引物和應用

有效

• 申請號: 202110387280.6
• 申請日: 2021-04-08
• 公開（公告）號: CN112941229B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 周揚顏;郭鵬;陳文秀;莫翱瑋;孫衛健;許鵬昊
• 申請（專利權）人: 山東大豐園農業有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

本發明公開了一種用于藍莓內參基因的實時熒光定量PCR引物對，包括針對藍莓actin7基因的PCR引物對和/或針對藍莓TUB基因的PCR引物對。前述實時熒光定量PCR引物對中的引物特異性強，具有很高的穩定性、可靠性和重復性，為在ABA脅迫等逆境脅迫下藍莓相關功能基因的精確定量研究提供有力支持，提高了研究的可靠性。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及一種藍莓內參基因及其引物和應用，特別涉及藍莓actin7基因和/或藍莓TUB基因作為藍莓內參基因及其引物和應用。

背景技術

藍莓(Vaccinium Spp)為杜鵑花科越橘屬多年生低灌木。原生于北美州與東亞，分布于朝鮮、蒙古、歐洲、北美洲以及中國黑龍江、內蒙古、吉林長白山等地區。藍莓果實中營養豐富，富含花青素，具有防止腦神經老化、強心、抗癌、軟化血管、增強人體免疫等功能。因為其具有較高的保健價值而風靡世界，是世界糧食及農業組織推薦的五大健康水果之一。然而，在栽培過程中藍莓植株時常會受到多種逆境脅迫的影響。因此，提高植物自身對逆境脅迫的生存力是藍莓育種工作的目標之一。而育種過程中就經常檢測不同轉錄本的表達量，為了準確定量，就需要有效的內參基因。

理想的內參基因應該是在不同組織類型、不同生長階段及不同環境條件下保持表達水平恒定。然而，尚未報道適用于所有不同條件的內參基因。因此，根據實驗條件和實驗材料篩選合適的內參基因，已成為應用實時熒光定量PCR進行基因組功能分析的重要前提。

目前，藍莓常見內參基因如18S rRNA基因、HIS、GAPDH等，其它關于藍莓逆境條件下內參基因的克隆及內參基因穩定性篩選的研究未見報道。如大多數植物在逆境條件下18S rRNA的表達量較高，當目的基因表達量低時18S rRNA不適合作為內參基因，此時最好配合其他內參基因一起使用，以提高qRT-PCR定量的準確性。因此，在研究藍莓逆境條件下功能基因表達中缺少合適的內參基因。

發明內容

本發明通過從藍莓基因組數據獲得內參基因，利用BestKeeper、NormFinder和RefFinder分析軟件和Delta Ct法對該基因的穩定性進行評價，表明兩個內參基因適用于藍莓ABA脅迫條件下基因表達研究，并用該基因為基因設計了實時熒光定量PCR引物，為后續藍莓功能基因的精確定量及功能研究奠定基礎。

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了下面的技術方案。

本發明第一方面提供了一種用于PCR反應的藍莓內參基因，所述內參基因為藍莓actin7基因和/或藍莓TUB基因。

本發明第二方面提供了一種用于藍莓內參基因的實時熒光定量PCR引物對，所述PCR引物對包括針對藍莓actin7基因的PCR引物對和/或針對藍莓TUB基因的PCR引物對。

在一些實施方式中，以藍莓actin7基因的成熟mRNA或所述藍莓actin7基因的成熟mRNA的片段為模板，設計得到所述針對藍莓actin7基因的PCR引物對。

在一些實施方式中，所述藍莓actin7基因的成熟mRNA的片段為藍莓actin7基因的mRNA編碼序列片段。

在一些實施方式中，以SEQ ID NO.5所示RNA序列為模板，設計得到所述針對藍莓actin7基因的PCR引物對。

在一些實施方式中，所述針對藍莓actin7基因的PCR引物對的特異性部分分別如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示。

在一些實施方式中，以藍莓TUB基因的成熟mRNA或所述藍莓TUB基因的成熟mRNA的片段為模板，設計得到所述針對藍莓TUB基因的PCR引物對。

在一些實施方式中，所述藍莓TUB基因的成熟mRNA的片段為藍莓TUB基因的mRNA編碼序列片段。