[發明專利]一種CHO細胞無血清無蛋白培養基及其用途

有效

• 申請號: 202110385870.5
• 申請日: 2021-04-11
• 公開（公告）號: CN112795531B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 俞錦鋒;陳旭;陳剛
• 申請（專利權）人: 依科賽生物科技（太倉）有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 孫永智

本發明公開了一種CHO細胞無血清無蛋白培養基及其用途。CHO細胞無血清無蛋白培養基由氨基酸、維生素、微量元素、無機鹽、碳水化合物、脂肪酸及其他功能性化合物組成。本發明的新型無血清無蛋白培養基通用性強，能同時支持CHO?K1、CHO?DG44、CHO?S、CHO?K1?GS^?/?等主流CHO細胞株的高密度懸浮培養，培養基無血清、無蛋白質，無任何動物源組分、化學成分限定、組分精簡且理化性質穩定；一方面可有效降低生產成本，提升培養基性能穩定性，另一方面適用于大規模生產，有利于后期產品的純化；本發明提供的CHO細胞無血清無蛋白培養基解決了無血清無蛋白培養基通用性差、組分復雜和穩定性差等不足。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，具體為一種CHO細胞無血清無蛋白培養基及其用途。

背景技術

目前，哺乳動物細胞的大規模培養與表達已成為生物藥生產特別是抗體藥生產的基石技術。與酵母等其它真核細胞系相比，哺乳動物細胞表達外源蛋白的優勢在于可表達含有復雜二硫鍵或翻譯后修飾的靶蛋白，且蛋白可分泌到培養液中，其產物蛋白的糖基化程度高且均一，有效提高藥效，同時減少藥物副作用。中國倉鼠卵巢細胞（CHO）是目前重組蛋白生產領域最具代表性的工程細胞，其具有高效擴增和表達的特點，在流加培養中單抗產量最高可超過10g/L。據統計，使用CHO細胞系作為表達載體開發的抗體藥物超過60%，使用CHO細胞生產的藥物已獲批上市29種。與此同時，針對CHO細胞培養的無血清開發平臺在經歷了含血清提取物的無血清培養基、無蛋白培養基、無動物源成分培養基，以及目前主流的化學成分限定培養基等幾個階段后產業化發展已初具規模。

化學成分限定培養基無血清，無蛋白，無動物源成分帶來的病毒等安全風險，且培養基各組分種類和濃度明確，能保證最終成品良好的穩定性和一致性，批間差異小，易于規模化生產和放大，同時有利于下游分離和純化。

Murakami等人以DF12為基礎培養基，通過添加5mg/L胰島素、2-35mg/L轉鐵蛋白、20μmol/L乙醇胺和1nmol/L亞硒酸鈉等組分，開發出經典的DF12-ITES配方。

中國專利CN 201310106385.5公開了一種支持CHO高密度懸浮培養的無血清無蛋白培養基，其中含有類固醇激素，而不含有轉鐵蛋白和胰島素。

中國專利CN 201410513086.8公開了一種適于動物細胞表達產品大規模生產的化學成分明確培養基，其成分至少包括14種氨基酸、8種維生素、10種無機鹽、2種核酸類化合物、1種激素及生長因子、2種抗氧化劑、1種螯合劑和2種其他營養物。

中國專利CN 201911347064 .8公開了一種CHO細胞懸浮培養的無血清無蛋白培養基及其用途，其化學成分明確，成本低廉，能支持CHO細胞更好的生長和更短的細胞倍增時間，但同時其配方中也含有很多功能并不明確的微量元素，如、硝酸銀、氯化鈷、醋酸鋇、硫酸鉻、氟化鈉等。

美國專利US 8198084B2公開了一種適用于哺乳動物細胞，尤其是上皮細胞和成纖維細胞體外懸浮培養的無血清無蛋白化學成分限定培養基配方，其中含鐵螯合劑、鋅離子和硫酸葡聚糖等組分。

美國專利US10138467B2公開了一種可顯著提高哺乳動物細胞流加培養性能的無血清無蛋白培養基及其配方設計開發方法。

鑒于無血清無蛋白化學成分限定培養基快速發展與壯大，國內早期以培養基DF12或IMDM為骨架基礎，通過添加各種營養物質、生長因子、細胞因子、蛋白水解物等來開發無血清培養基配方的策略已遠遠無法滿足現代生物制品產業對于安全、質量和規模化的需求，同時早期培養基配方中脂肪酸、微量元素、核苷類以及生長因子類化合物的冗余添加造成的配方復雜性和不穩定性，對于工業化生產來說提出了更嚴峻的挑戰。針對上述缺陷，發明開發了一種適用于CHO細胞高密度懸浮培養的新型無血清無蛋白培養基，通過精簡培養基配方組分和實施新型化合物的替代，保證了終產品的最終穩定性和安全性，且生產易于規模化放大。

發明內容