[發明專利]一種兔巴氏桿菌病二價滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 202110385637.7
• 申請日: 2021-04-10
• 公開（公告）號: CN112843228B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 王錦祥;謝喜平;孫世坤;陳巖鋒;陳冬金;桑雷
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/102;A61P31/04
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明涉及一種兔巴氏桿菌病二價滅活疫苗及其制備方法。所述滅活疫苗含有兔A型多殺性巴氏桿菌為多殺性巴氏桿菌PmA04（CCTCC NO：M 2021202），及兔D型多殺性巴氏桿菌為多殺性巴氏桿菌PmD01（CCTCCNO：M 2021201）。所述的二價滅活疫苗是用多殺性巴氏桿菌PmA04和多殺性巴氏桿菌PmD01作為抗原滅活后再加入體積終濃度為10%的法國賽比克公司的商品化MONTANIDE^TM GEL 02 PR佐劑制備得到。本發明的二價滅活疫苗能同時預防A型多殺性巴氏桿菌和D型多殺性巴氏桿菌對兔的感染，具有一針兩防的效果，且滅活疫苗安全可靠，不存在散毒的隱患。

技術領域

本發明涉及一種兔巴氏桿菌病二價滅活疫苗及其制備方法，屬于兔用疫苗制備技術領域。

背景技術

兔巴氏桿菌病是由多殺性巴氏桿菌感染引起兔的一種傳染病。該病一年四季均可發生，且所有日齡的兔均可發病，是兔的常發病和多發病。臨床上，兔巴氏桿菌病以呼吸道癥狀多見，也可見中耳炎、結膜炎和子宮積膿等癥狀。多殺性巴氏桿菌在我國兔群中廣泛流行，其感染常常引起嚴重的經濟損失，是阻礙兔產業發展的重要病原之一。多殺性巴氏桿菌血清型眾多，根據多殺性巴氏桿菌的莢膜抗原可將其分為5種血清型，即A、B、D、E和F型，各血清型的菌株之間無交叉保護。近年來的研究調查表明，A型多殺性巴氏桿菌和D型的多殺性巴氏桿菌已經成為我國兔群中的主要流行菌株，且常見這兩種血清型菌株的混合感染。然而，目前我國僅有針對兔A型多殺性巴氏桿菌的商品化滅活疫苗。當前我國兔群中D型多殺性巴氏桿菌也很常見，現有疫苗不能對其起到預防作用。因此，亟需一種新的能同時預防我國兔群中A型多殺性巴氏桿菌和D型多殺性巴氏桿菌的二價滅活疫苗以有效地預防和控制兔巴氏桿菌病。

發明內容

本發明的目的在于提供一種包含了A型多殺性巴氏桿菌和D型多殺性巴氏桿菌的二價滅活疫苗及其制備方法。所述菌株的血清型能代表我國兔群中主要流行菌株的血清型，通過該方法制備得到的滅活疫苗可以更好、更全面的保護兔抵抗多殺性巴氏桿菌的感染。

本發明所提供的二價滅活疫苗，包含抗原和佐劑，其中抗原為滅活的兔A型多殺性巴氏桿菌和兔D型多殺性巴氏桿菌；佐劑為法國賽比克公司的商品化MONTANIDE^TM GEL 02PR佐劑。

所述的兔A型多殺性巴氏桿菌是從多例呼吸道病死兔肺臟樣品中分離和篩選得到的對兔具有強致病性的多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida ）PmA04，該菌已于2021年3月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M 2021202。地址為武漢大學。

所述的兔D型多殺性巴氏桿菌是從多例呼吸道病死兔肺臟樣品中分離和篩選得到的對兔具有強致病性的多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida ）PmD01，該菌已于2021年3月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO：M 2021201。地址為武漢大學。

所述的二價滅活疫苗中，兔A型多殺性巴氏桿菌抗原含量和兔D型多殺性巴氏桿菌抗原含量均為1.8×10¹⁰-9.0×10¹⁰ CFU/mL。

本發明提供的二價滅活疫苗，其制備方法如下：

1）將兔A型多殺性巴氏桿菌PmA04和兔D型多殺性巴氏桿菌PmD01分別接種到腦心浸液培養基中擴大培養，得到兔A型多殺性巴氏桿菌菌液和兔D型多殺性巴氏桿菌菌液；

2）分別向步驟1）培養好的兔A型多殺性巴氏桿菌菌液和兔D型多殺性巴氏桿菌菌液中加入終濃度為0.2%（V/V）的甲醛，37℃ 100rpm滅活24小時，得到滅活菌液；