[發明專利]抗TdT蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110384586.6
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113265003B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 陳泳;楊清海;陳惠玲;王小亞;胡濱陽;陳昌星
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/574
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人TdT抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案選取TdT蛋白C末端的1?150位氨基酸為抗原肽，進行密碼子優化，成為適合在大腸桿菌BL21(DE3)表達的基因片段，最后得到的重組蛋白包含TdT蛋白片段及組氨酸蛋白標簽。所述重組蛋白對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗TdT蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株32D5,以及由該細胞株所分泌的抗TdT蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達TdT蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗TdT蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

末端脫氧核苷酸轉移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)是細胞核內的一種酶，為無須模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結合到DNA分子3’-OH端。TdT分子量為32000道爾頓，由α和β兩個肽鏈構成，后兩者分子量分別為8000道爾頓和24000道爾頓。

TdT基因位于人染色體10q23-q24，位于鼠染色體19。TdT有多方面的功能，其主要功能有：TdT可以作為一種無須模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結合到DNA分子3’-OH端，例如利用外源末端脫氧核苷酸轉移酶對DNA鏈斷裂的3’-OH末端進行熒光標記；MoteaE A等研究發現：在抗體基因重排期間，TdT可將核糖核苷酸加入到T細胞受體和B細胞受體V、D和J的外顯子區；正常情況下TDT可在胸腺組織中表達，也可在兒童及年輕人的扁桃體、淋巴結中少量表達。

TdT在淋巴造血系統腫瘤的診斷中具有重要的意義，其在急性髓系白血病的腫瘤細胞中陰性表達，而在急性淋巴細胞白血病的腫瘤細胞中陽性表達，可作為鑒別急性淋巴細胞白血病和急性髓系白血病的標志物。此外，TdT可表達于幼稚的T淋巴細胞和B淋巴細胞，在T淋巴母細胞淋巴瘤和B淋巴母細胞淋巴瘤中表達，常用于胸腺瘤和T、B淋巴母細胞淋巴瘤的病理診斷中。

此外，TdT還可在多種腫瘤中表達，包括皮脂腺腫瘤、神經內分泌腫瘤和泌尿系統腫瘤等。Buresh CJ等研究發現，TdT可在Merkel細胞癌中表達，其陽性率為73％。Sidiropoulos M等研究發現，TdT在Merkel細胞癌中陽性率為70％(28/40)，其中25％為中等強度陽性，而在小細胞肺癌中陽性率僅為7％(2/30)。Kolhe R等研究發現，TdT在Merkel細胞癌和小細胞肺癌中表達的陽性率分別為78％(21/27)和90％(9/10)。Brobeil A等研究發現，在10例精原細胞腫瘤中TdT均陽性(呈中等至強陽性)。

發明內容

發明人提供了一種抗TdT蛋白單克隆抗體，由保藏號為CGMCC NO 20777的雜交瘤細胞株產生。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別TdT蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG_2b亞型單克隆抗體。

發明人又提供了一種抗TdT蛋白單克隆抗體的制備方法，其用于免疫小鼠的抗原為重組蛋白，所述重組蛋白由大腸桿菌重組表達，包含TdT蛋白片段及組氨酸蛋白標簽。

進一步地，所述TdT蛋白片段為TdT蛋白的第1位至第150位氨基酸片段，其氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。