[發明專利]抗CDX2蛋白的單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110384583.2
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113265000B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 吳楠楠;王小亞;楊清海;陳惠玲;程本亮
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/574;C12R1/91
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人CDX2抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案化學合成CDX2蛋白C末端的84?100位氨基酸為抗原肽，偶聯KLH后得到免疫原。所述CDX2?KLH蛋白對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗CDX2蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株12B6,以及由該細胞株所分泌的抗CDX2蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達CDX2蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗CDX2蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

CDX-2(尾側型同源轉錄因子2(Caudal type homeobox transcription factor-2)屬腸特異性轉錄因子，編碼基因位于染色體13q12～13，由3個外顯子和2個內含子構成，與之對應的CDX2蛋白包含311個氨基酸殘基，通過螺旋-環-螺旋的方式結合于DNA的相應區域，以轉錄因子的形式調節靶基因的表達。CDX2參與調節腸細胞發育過程中的多個步驟，包括細胞增殖、分化、黏附以及遷移，尤其是在早期腸分化過程中起重要作用。人體CDX2主要是在內胚層來源的腸道上皮、胰腺導管和腺泡上皮中表達，但在正常胃黏膜和食管上皮中不表達。近年來，CDX2被證實可以通過作用于某些腸道特異性基因誘導胃上皮細胞轉分化為腸型上皮細胞，可能與胃癌的發生發展相關。研究顯示CDX2蛋白在腸化生組織中的表達顯著高于慢性胃炎和胃癌組織，提示CDX2可能在胃黏膜腸化生及胃癌發生過程中起重要作用。CDX2在腸型胃癌中呈高表達而在彌漫型胃癌中低表達，可能對胃癌起抑制作用。研究顯示CDX2能夠抑制MGC-803胃癌細胞的生長和增殖，使細胞周期停滯在G0/G1期，并抑制胃癌細胞的侵襲和轉移能力。另外，CDX2也可以通過逆轉上皮-間質轉化的過程在胃癌中發揮著抑癌基因的作用。

發明內容

發明人提供了一種抗CDX2單克隆抗體，由保藏號為CGMCC NO 20768的雜交瘤細胞株產生。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別CDX2蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG_2a亞型單克隆抗體。

發明人又提供了一種抗CDX2蛋白單克隆抗體的制備方法，選取CDX2蛋白中SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列(第84位至第100位),在其羧基端添加了一個半胱氨酸后，與載體蛋白KLH進行偶聯作為免疫原。

發明人還提供了一株分泌抗CDX2蛋白分子的雜交瘤細胞株，所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞株12B6，所述細胞株已于2020年9月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO 20768，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

發明人還提供了上述單克隆抗體在CDX2蛋白免疫檢測中的用途。

進一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學法，免疫印跡法和酶聯免疫法。

區別于現有技術，本發明所產生的有益技術效果為：上述技術方案選取CDX2蛋白C末端的第84位至第100位氨基酸為抗原肽,偶聯KLH后得到的免疫原對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗CDX2蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株12B6,以及由該細胞株所分泌的抗CDX2蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達CDX2蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。