[發明專利]一種制備Fe3

有效

• 申請號: 202110383736.1
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113080466B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 王旭梅;孫慶;柳晨娜;汪海;王輝;涂宗財;溫平威;胡月明
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: A23L33/18
• 分類號: A23L33/18;A23L33/105;A23L5/30;A23L33/16;A23J3/34
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 袁紅梅

1.一種制備Fe₃O₄/膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物磁性生物復合材料的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1.魚明膠二步酶解

向魚明膠中加入胃蛋白酶進行水解；水解完成后，調節溶液pH，再加入木瓜蛋白酶進行水解，獲得膠原混肽母液；該膠原混肽母液經冷凍干燥后得到膠原混肽初干粉；

2.膠原混肽分離純化

利用凝膠色譜技術分離步驟1得到的膠原混肽初干粉，利用高效液相色譜技術分析膠原混肽的分子量大小，并收集分子量在1000Da以下的膠原混肽；

3、高壓脈沖電場促羥基自由基生成

向膠原混肽溶液中加入過氧化氫和抗壞血酸混合后，采用高壓脈沖電場處理，以促進羥基自由基生成；

4、膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物制備

向步驟3中的溶液中加入大豆異黃酮，采用超聲技術處理，制備膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物；

5、膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物分離純化

采用AB-8大孔樹脂和Sephadex?LH-20分二步分離純化膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物；

6、Fe₃O₄/膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物磁性復合材料制備

將制備的磁性Fe₃O₄納米粒子和膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物分別制備成溶液，按1：10～50比例混合，在50～60℃恒溫水浴鍋中磁力攪拌反應15～24h，分離上澄清液，經冷凍干燥后得到Fe₃O₄/膠原混肽-大豆異黃酮共價化合物磁性復合材料；

所述步驟1中相對于10份的魚明膠，胃蛋白酶的加入量為1～3份；胃蛋白酶的水解pH值是2～3，胃蛋白酶的水解時間為1～3h；

所述步驟1中相對于10份的脫腥魚明膠，木瓜蛋白酶的加入量為1～2份；木瓜蛋白酶的水解pH調節為6.8～7.2，木瓜蛋白酶的水解時間為1～3h；

所述步驟1中膠原混肽母液經6000～7000rpm離心20～30min后，收集上澄清液經冷凍干燥48h后獲得膠原混肽初干粉；

所述步驟2中凝膠色譜技術所用的填料是Sephadex?G-25，玻璃層析柱規格是1.6*50cm，流動相為超純水，平衡層析柱所用流動相流速為0.5～0.6mL/min，進樣量100～200mg，洗脫樣品的流動相流速是0.4～0.5mL/min；

所述步驟2中高效液相色譜技術所用流動相包括含0.1～0.2％三氟乙酸的乙腈和超純水；相對40份乙腈，超純水為60份；

所述步驟3中相對5份過氧化氫，抗壞血酸為1～3份；步驟3中脈沖電場處理強度為40～60kV/cm，處理時間為40～60s，每隔10～15min處理一次，總時長為0.5～1h；

所述步驟4中相對于9份的膠原混肽，大豆異黃酮的加入量為0.5～1份；步驟4中大豆異黃酮包括黃豆苷原、黃豆黃苷和染料木苷，使用比例為0.1～0.5：0.1～0.5：0.1～0.5；步驟4超聲處理功率為400～600W，處理時間為1～2h；

所述步驟5中AB-8大孔樹脂層析柱的流動相為含0.1～0.3％鹽酸的超純水和95％的乙醇溶液；步驟5中Sephadex?LH-20層析柱的流動相為80～100％的乙醇溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟6中磁性Fe₃O₄納米粒子制備方法為：2～3份FeCl₃·6H₂O中加入1～2份FeSO₄·7H₂O并加水溶解，攪拌該混合物使其混勻，在70～80℃下加熱該混合物2～4h；該過程中加入濃氨水將pH調節至9～11，使溶液變黑；整個反應過程用氮氣作為保護氣體；得到的黑色產品用超純水清洗干凈后，置于40～60℃真空干燥箱中干燥24～48h，最后得到磁性Fe₃O₄納米粒子。