[發明專利]丁苯嗎啉對映體拆分及在農產品中的殘留分析方法

有效

• 申請號: 202110383727.2
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113176352B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 張新忠;黎洪霞;奚文偉;顧建波;羅逢健
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院茶葉研究所;浙江欣禾生物股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.丁苯嗎啉對映體拆分，其特征在于包括以下步驟：

1）丁苯嗎啉外消旋體溶液的配制：稱取丁苯嗎啉外消旋體樣品，采用甲醇或乙腈配制成丁苯嗎啉外消旋體溶液，備用；

2）丁苯嗎啉外消旋體的分離：以步驟1）配制的丁苯嗎啉外消旋體溶液為標準溶液進樣，利用液相色譜紫外檢測器在一定的色譜條件下洗脫分離丁苯嗎啉外消旋體，得到兩個峰值，分別為丁苯嗎啉外消旋體中的兩個對映單體，同時在餾分收集器中收集丁苯嗎啉手性單體餾分；

3）丁苯嗎啉外消旋體兩個單體的確證：以步驟1）配制的丁苯嗎啉外消旋體溶液為標準溶液進樣，利用液相色譜激光偏振儀檢測器在一定的色譜條件下洗脫分離檢測丁苯嗎啉外消旋體，確定先流出的為（-）-丁苯嗎啉，后流出的為（+）-丁苯嗎啉；

其中，步驟2）和步驟3）中一定的色譜條件為采用Superchiral S-OJ色譜柱分離，色譜柱規格為0.46cm I.D.× 15cm L, 5μm，流動相為甲醇/二乙胺，體積比為100/0.05，流速0.80 mL min^-1，進樣量20 μL，柱溫30℃，紫外檢測器波長230 nm，激光偏振儀檢測器波長670nm。

2.如權利要求1所述的丁苯嗎啉對映體拆分，其特征在于步驟1）中丁苯嗎啉外消旋體溶液濃度為0.0025-10000 mg L^-1。

3.丁苯嗎啉對映體在農產品中的殘留分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1）農產品樣品的提取凈化，將農產品樣品采用酸化水溶液和乙腈混合提取，鹽析后，C₁₈、PSA和GCB分散固相萃取凈化，濃縮后乙腈/水定容，用帶質譜檢測器的液相色譜儀基質外標法檢測；

2） 取配制好的丁苯嗎啉外消旋體溶液，分別用體積比4：6的乙腈/水稀釋成混合標準溶液20 mg/L，然后將步驟1）處理后農產品樣品基質用體積比4:6的乙腈/水分別配制成5.0、2.50、1.0、0.25、0.05、0.010和0.0025 mg/L的基質標準溶液，對映單體濃度為一半，超高效液相色譜串聯質譜儀UPLC-MS/MS進樣分析，每個濃度測定3次，以濃度為橫坐標x，峰面積平均值為縱坐標y，得到不同基質中丁苯嗎啉對映體標準曲線和線性相關系數；

3）計算添加回收率、相對標準偏差、方法的檢測限和定量限，滿足殘留分析要求；將按照步驟1）處理后的農產品實際樣品中的丁苯嗎啉對映體采用基質外標法計算殘留量；

其中，步驟2）中超高效液相色譜條件為：3 μm×150 mm×2 mm Lux?3 μm Cellulose-3色譜柱；柱溫50℃；進樣量5μL；流速0.35 mL/min；流動相A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為0.1%甲酸乙腈；梯度洗脫程序為： 0-10.0 min，16%-22% B；10.0-11.0 min，22%-95% B， 保持3 min的95% B； 14.0-14.2min，95%-16%B，隨后保持1.8 min的16%B，整個分析時間16min。

4.如權利要求3所述的丁苯嗎啉對映體在農產品中的殘留分析方法，其特征在于步驟1）中農產品樣品的提取凈化的具體過程為：將農產品樣品磨碎后稱取2-10g至離心管中，加入10mL的2%甲酸水溶液，充分渦旋混勻后，再加入20mL乙腈，渦旋混勻后均質，再加入5gNaCl，渦旋混勻后均質再離心，吸取8mL上層溶液至裝有50mg C₁₈、20mg GCB和20mg PSA的10mL離心管中，渦旋震蕩凈化1min后離心，過膜吸取上清液6mL于50mL雞心瓶中，旋轉濃縮干后，加入1.2mL 體積比為4：6的乙腈/水超聲輔助溶解定容，過0.22μm濾膜至進樣瓶中，UPLC-MS/MS基質外標法定量待測。

5.如權利要求3所述的丁苯嗎啉對映體在農產品中的殘留分析方法，其特征在于步驟2）中質譜儀的質譜條件為：電噴霧正電離多反應檢測模式ESI⁺-MRM；電噴霧毛細管電壓3.5kV；離子源溫度150 ℃；脫溶劑氣N₂溫度350℃，流速700 L/h；錐孔反吹氣N₂流速50 L/h；碰撞氣Ar流速0.30 mL/min；電子倍增器倍增電壓700V；二級母離子駐留時間0.02s；丁苯嗎啉對映體母離子m/z 304.2，錐孔電壓30 V，定量子離子m/z 147和定性子離子m/z 98，碰撞電壓均為30 eV。