[發明專利]抗CA125蛋白的單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110383268.8
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113061186B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 高惠然;楊清海;王小亞;陳惠玲;林洋;李萍
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;G01N33/574;C12N5/20;C12N15/70;C07K19/00;C12R1/19
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人CA125抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案選取CA125蛋白C末端的13837?14184氨基酸為抗原肽，進行密碼子優化，成為適合在大腸桿菌BL21(DE3)表達的基因片段，最后得到的重組蛋白包含CA125蛋白片段及組氨酸蛋白標簽。所述重組蛋白對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗CA125蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株20E3,以及由該細胞株所分泌的抗CA125蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達CA125蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗CA125蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

CA125是一種由定位于染色體19pl3.2區域、含有5797個堿基對的基因表達的跨膜大分子糖蛋白，因可被卵巢的漿液性囊腺癌單克隆抗體OC125識別，故被命名為卵巢癌相關抗原，它在卵巢上皮性癌中檢測率較高，是目前上皮性卵巢癌的重要標志物之一，在卵巢癌的預防、篩查、病情監測、和預后方面已獲得了許多有意義的結果。隨著對CA125的廣泛應用及研究，發現不僅卵巢細胞和肺癌細胞產生，而且在正常人漿膜上皮細胞(如胸膜、心包膜、腹膜、子宮內膜、宮頸內膜及正常肺組織包括呼吸道黏膜的柱狀上皮細胞和腺體等)均可分泌CA125。由于CA125合成于上皮細胞，并儲存于細胞內，正常時因細胞基膜的阻擋作用和細胞間的連接而不能入血，但在腫瘤的演進、復發、轉移及其他較嚴重的非腫瘤性疾病過程中，細胞的上述保護屏障遭到破壞，CA125得以釋放，因此，在多種惡性腫瘤中可檢測到異常增高的CA125。

有研究表明，在卵巢癌中CA125水平和腫瘤大小、腫瘤分期密切相關。利用CA125還可判斷殘存腫瘤情況，CA125估計再手術的敏感性為50％，特異性為96％。第一個化療周期后CA125水平可提示疾病的預后，如能降至原來水平的1/10表明病情轉歸良好；三個化療周期后CA125水平持續升高者預后較差。CA125預測腫瘤復發、轉移的精確度為75％。從CA125升高到出現臨床癥狀有3-4個月。80％-90％病例中CA125與疾病的預后和轉歸有關。雖然CA125對卵巢癌有一定的診斷價值，但對于早期患者其診斷的敏感性還是較低。有研究者對早期卵巢癌患者進行檢測，固定特異性為98％，單獨檢測的敏感性為48％。雖然CA125并非卵巢癌診斷“金標準”，但是CA125在卵巢癌的療效及預后監測中發揮重要的作用。在卵巢癌患者中，約90％的病例血清CA125的升高與疾病的進展相關。總之，CA125在卵巢癌的診斷、療效監測和病情隨訪方面有著很好的應用前景。

發明內容

發明人提供了一種抗CA125單克隆抗體，由保藏號為CGMCC NO 20773的雜交瘤細胞株產生。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別CA125蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG_2b亞型單克隆抗體。

發明人又提供了一種抗CA125蛋白單克隆抗體的制備方法，其用于免疫小鼠的抗原為重組蛋白，所述重組蛋白由大腸桿菌重組表達，包含CA125蛋白片段及組氨酸蛋白標簽。

進一步地，所述CA125蛋白片段為CA125蛋白的第13837位至第14184位氨基酸片段，其氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。