[發(fā)明專利]表達(dá)人EPO的經(jīng)遺傳修飾的非人動物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110382598.5
• 申請日: 2015-05-18
• 公開（公告）號: CN113045639A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·J·墨菲;S·史蒂文斯;R·弗拉維爾;M·曼茨;單亮
• 申請（專利權(quán)）人: 再生元制藥公司;耶魯大學(xué);生物醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K14/505;C07K14/52;C07K14/535;C07K14/54;C07K14/715;C12N9/00;C12Q1/18;G01N33/50;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京龍雙利達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11329
• 代理人: 孫濤;毛威

1.一種用于生成經(jīng)遺傳修飾的嚙齒動物的方法，其包含：

生成包含下述各項(xiàng)的嚙齒動物：

與嚙齒動物EPO基因基因座處的內(nèi)源嚙齒動物EPO啟動子可操作連接的編碼人EPO(hEPO)蛋白質(zhì)的核酸序列，其中所述可操作連接導(dǎo)致所述嚙齒動物EPO基因基因座處的嚙齒動物EPO基因中的無效突變，

與嚙齒動物M-CSF基因基因座處的內(nèi)源嚙齒動物M-CSF啟動子可操作連接的編碼人M-CSF(hM-CSF)蛋白質(zhì)的核酸序列，其中所述嚙齒動物對于所述嚙齒動物M-CSF基因是雜合無效或純合無效的，

與嚙齒動物IL-3基因基因座處的內(nèi)源嚙齒動物IL-3啟動子可操作連接的編碼人IL-3(hIL-3)蛋白質(zhì)的核酸序列，其中所述嚙齒動物對于所述嚙齒動物IL-3基因是雜合無效或純合無效的，

與嚙齒動物GM-CSF基因基因座處的內(nèi)源嚙齒動物GM-CSF啟動子可操作連接的編碼人GM-CSF(hGM-CSF)蛋白質(zhì)的核酸序列，其中所述嚙齒動物對于所述嚙齒動物GM-CSF基因是雜合無效或純合無效的，

與嚙齒動物TPO基因基因座處的內(nèi)源嚙齒動物TPO啟動子可操作連接的編碼人TPO(hTPO)蛋白質(zhì)的核酸序列，其中所述嚙齒動物對于所述嚙齒動物TPO基因是雜合無效或純合無效的，和

編碼人Sirpa(hSirpa)蛋白質(zhì)的Sirpa轉(zhuǎn)基因，其中所述嚙齒動物表達(dá)hSirpa蛋白質(zhì)，

其中所述經(jīng)遺傳修飾的嚙齒動物是免疫缺陷的。

2.依照權(quán)利要求1的方法，其中所述嚙齒動物對于包含所述編碼hEPO的核酸序列的等位基因是純合的。

3.依照權(quán)利要求1或2的方法，其中所述編碼hEPO的核酸序列包含人EPO基因組編碼和非編碼序列。

4.依照權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的方法，其中所述編碼hEPO的核酸序列包含人EPO cDNA序列。

5.依照權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的方法，其中所述嚙齒動物對于所述編碼hTPO的核酸序列，所述編碼hM-CSF的核酸序列，所述編碼hIL-3的核酸序列，和所述編碼hGM-CSF的核酸序列是純合的。

6.依照權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的方法，其中所述嚙齒動物進(jìn)一步包含人造血細(xì)胞的移入，其中任選地所述人造血細(xì)胞包含一種或多種選自下組的細(xì)胞：人CD34陽性細(xì)胞，人造血干細(xì)胞，人髓樣細(xì)胞前體細(xì)胞，人類紅細(xì)胞前體細(xì)胞，人髓樣細(xì)胞，人樹突細(xì)胞，人單核細(xì)胞，人粒細(xì)胞，人紅細(xì)胞，人嗜中性粒細(xì)胞，人肥大細(xì)胞，人胸腺細(xì)胞，和人B淋巴細(xì)胞。

7.依照權(quán)利要求6的方法，其中所述嚙齒動物包含氯膦酸鹽。

8.依照權(quán)利要求7的方法，其中所述嚙齒動物進(jìn)一步包含靶向類紅細(xì)胞譜系的人細(xì)胞的病原體的感染，其中任選地所述病原體選自瘧原蟲(Plasmodium sp.)，巴貝蟲(Babesiasp.)，和泰勒蟲(Theileri sp.)。

9.依照權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫缺陷是由Rag2和Il2rg二者的缺陷引起的。

10.依照權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法，其中所述嚙齒動物是小鼠。

11.一種用于生成經(jīng)遺傳修飾的小鼠的方法，其中所述經(jīng)遺傳修飾的小鼠為

MISTER-G小鼠，

SupER-G小鼠，

MITERG小鼠，

MITRG小鼠，或

TIES小鼠。

12.一種或多種選自下組的寡核苷酸及其用途：

CATCTGCGACAGTCGAGTTC(SEQ ID NO:8)；

CCAGGGAGCTTACCGTGAC(SEQ ID NO:9)；

FAM-AGGTACATCTTAGAGGCCAAGGAGGCA-BHQ(SEQ ID NO:10)；

ACAGCCGAGTCCTGGAGAG(SEQ ID NO:11)；

AAGCCCTGAGCGTGAGTTC(SEQ ID NO:12)；

FAM-AGGCCAAGGAGGCCGAGAATATCACG-BHQ(SEQ ID NO:13)；

GAGCCCTGCACTGGACAAC(SEQ ID NO:14)；

TCCCATGAACGCTGAGAGTC(SEQ ID NO:15)；和

AGGGTCAAGGAGCCATAGACAGAATGGC(SEQ ID NO:16)。