[發明專利]氧化石墨烯片在制備DC疫苗免疫佐劑中的應用、DC疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 202110381548.5
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113069541A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 周欠欠;孫蘇靜;王小慧;詹林盛
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 張夢澤

本發明提供了氧化石墨烯片在制備DC疫苗免疫佐劑中的應用、DC疫苗及其制備方法，屬于DC疫苗技術領域；所述氧化石墨烯片的片徑≥1000nm；所述氧化石墨烯片能夠黏附于DC細胞膜表面，進而促進DC與T細胞間IS的形成，顯著增強CD8+T細胞的活化增殖能力。與傳統的細胞因子雞尾酒佐劑相比，以片徑≥1000nm的氧化石墨烯片作為佐劑的DC疫苗，可誘導抗原特異性的CD8+T細胞反應提高20倍以上。

技術領域

本發明涉及DC疫苗技術領域，尤其涉及氧化石墨烯片在制備DC疫苗免疫佐劑中的應用、DC疫苗及其制備方法。

背景技術

樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)作為一類專職抗原提呈細胞，是連接先天免疫和適應性免疫的重要橋梁。DC細胞主要通過“雙信號”啟動未致敏T細胞的免疫應答。其中MHC-II復合物與T細胞抗原受體(TCRs)結合提供活化的第一信號，共刺激分子和促炎細胞因子結合的協同刺激提供第二信號。目前，針對DC疫苗的大多數佐劑優化都是基于上述理論來進行的。例如，利用病毒載體或納米載體提高DC對抗原的吞噬和遞呈，或優化佐劑配方促進DC成熟和細胞因子分泌。這些嘗試都可以在一定程度上提供DC疫苗的有效性。然而，15％的總體反應率仍然遠低于人們的預期。

TCRs及其配體各自只有7.5nm長，因此它們的識別需要DC和T細胞膜之間非常密切的接觸，這種接觸也被稱為免疫突觸(Immunological Synapse，IS)。IS是在DC和T細胞之間的界面形成的，被認為是負責抗原識別和T細胞活化的結構基礎。而IS的形成是一個受到多種分子嚴密調控的生物過程，其標志為多種黏附分子向細胞膜的再分配。鑒于此，控制DC-T細胞間的IS形成成為DC疫苗優化的關鍵點之一。但是，現有的免疫佐劑不能有效促進DC與T細胞間形成IS，進而也就不利于T細胞的活化增殖。

發明內容

本發明的目的在于提供氧化石墨烯片在制備DC疫苗免疫佐劑中的應用、DC疫苗及其制備方法，所述氧化石墨烯片作為免疫佐劑時能夠黏附于DC細胞膜表面，進而促進DC與T細胞間IS的形成，顯著增強CD8+T細胞的活化增殖能力。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了氧化石墨烯片在制備DC疫苗免疫佐劑中的應用，所述氧化石墨烯片的片徑≥1000nm。

優選的，所述氧化石墨烯片的片徑≤1500nm。

優選的，所述氧化石墨烯片的片層厚度為0.8～2nm。

本發明還提供了一種以氧化石墨烯片作為免疫佐劑的DC疫苗，包括以下原料：氧化石墨烯片和未成熟DC細胞；所述氧化石墨烯片的片徑≥1000nm。

優選的，所述氧化石墨烯片的質量和未成熟DC細胞的個數的比例為(5～15)μg：(1×10⁶～5×10⁶)cells。

本發明還提供了上述方案所述DC疫苗的制備方法，包括以下步驟：

將未成熟DC細胞的細胞懸浮液與氧化石墨烯片混合；

將所述混合得到的待孵育體系進行孵育，得到DC疫苗。

優選的，所述待孵育體系中氧化石墨烯片的濃度為5～15μg/mL。

優選的，所述待孵育體系中氧化石墨烯片的濃度為9μg/mL。

優選的，所述未成熟的DC細胞的細胞懸浮液中未成熟DC細胞的濃度為1×10⁶～5×10⁶cells/mL。

優選的，所述孵育的溫度為36～37℃；所述孵育的時間為48～50h。