[發明專利]一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法與流程

在審

• 申請號: 202110380855.1
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113075333A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 周道志;勞波
• 申請（專利權）人: 湛江國聯水產開發股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

1.一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：該檢測方法使用到的原料和器材包括：組織粉碎機、容器、離心管、鹽酸溶液、勻漿機、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生試劑、恒溫水浴鍋、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振蕩器、吹氮濃縮儀和吹氮管；

該同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法包括如下步驟：

S1：將水產品組織樣品、鹽酸溶液和2-硝基苯甲醛混合，在水浴條件下進行衍生化，得到衍生液；

S2：將所述衍生液、磷酸二氫鉀、氫氧化鉀和乙酸乙酯進行混合，進行提取，得到提取液；

S3：采用正己烷對所述提取液進行凈化，將所得凈化液進行濃縮，得到濃縮液；

S4：對所述濃縮液中硝基呋喃代謝物和氯霉素的殘留量進行檢測；

S5：將所述濃縮液用1ml純凈水溶解，得到待測液，將所述待測液經0.22μm濾膜過濾后，采用液相色譜-串聯質譜儀進行檢測。

2.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃代謝物包括呋喃它酮代謝物、呋喃唑酮代謝物、呋喃妥因代謝物和呋喃西林代謝物。

3.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所有試劑均為分析純水，且為GB/T6682規定的一級水。

4.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃類藥物代謝物衍生物的色譜條件包括：

色譜柱：菲羅門C18，150mm×2.0mm（id），粒度5μm，luna；

流動相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。

5.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述氯霉素的液相色譜條件包括：

色譜柱：菲羅門C18，150mm×2.0mm（id），粒度5μm，luna；

流動相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。

6.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述甲酸水溶液為現用現配，且配制方法優選為將1ml色譜純甲酸溶于水中，并且定容至1000ml。

7.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述乙腈為色譜純乙腈，且甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷均為高效液相色譜級。

8.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述鹽酸溶液的濃度為0.2Mol/L，且鄰硝基苯甲醛的溶液的濃度為100mMol/L，并且磷酸二氫鉀溶液的濃度為0.1Mol/L，而且衍生化的溫度為60℃，同時時間為0.5h。

9.根據權利要求1所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃代謝物和氯霉素殘留量的操作流程，其特征在于：包括如下步驟：

第一步，試樣制備：蝦去殼取蝦肉，用組織粉碎機勻質，裝入潔凈容器內，密封，標記，并在-18℃保存，每份樣品量不少于100g；

第二步，提取步驟：稱取經肉類組織粉碎機粉碎的試樣2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入10mL0.2Mol/L鹽酸溶液在勻漿機上以16000r/min速度勻漿15秒，用5mL0.2Mol/L鹽酸溶液洗滌勻漿刀，合并提取液；

第三步，樣品恒溫孵育：離心管中加入400μL100mMol/L新配制的2-硝基苯甲醛（NBA）衍生試劑振蕩1分鐘；放在60℃恒溫水浴鍋中反應0.5小時，孵育過程要注意避光操作；

第四步，樣品提?。弘x心管在4500r/min下離心10min，上清液轉入另一離心管中，殘渣棄去，上清液中加入5mL0.1Mol/LKH2PO4溶液，用1Mol/LKOH溶液調節pH值在7～7.5范圍，離心管中加入10mL乙酸乙酯，在振蕩器上震蕩5分鐘，以4500r/min速度離心10min；

第五步，凈化方法：吸取5mL上層清液（相當于1g樣品）移至吹氮濃縮儀的吹氮管中，在50℃下用氮氣將試管內的溶劑揮干，殘渣用1mL純凈水溶解，漩渦振蕩器上混漩60秒，加入3mL正己烷，漩渦振蕩器上混漩60秒，在4500r/min下離心10min后，樣液經0.22μm濾膜過濾后上機測定。