[發(fā)明專利]一種鴨IL-2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒及其制備方法

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• 申請日: 2021-04-08
• 公開（公告）號: CN113308477A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 焦培榮;歐陽國文;廖明;張友;曲楠楠;王文清;王霞
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/26
• 分類號: C12N15/26;C12N15/85;C12N15/66;A61K38/20;A61K39/39;A61K48/00;A61P37/04
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發(fā)明公開了一種優(yōu)化的鴨IL?2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒及其制備方法。本發(fā)明首先根據(jù)鴨密碼子偏嗜性將鴨IL?2基因進(jìn)行優(yōu)化，所得優(yōu)化的鴨IL?2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，再將優(yōu)化的鴨IL?2基因連接到真核表達(dá)載體pCAGGK，得到了鴨IL?2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒。本發(fā)明獲得的真核表達(dá)重組質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)能成功表達(dá)鴨IL?2蛋白，真核表達(dá)重組質(zhì)粒可作為免疫增強(qiáng)劑和免疫佐劑使用，增強(qiáng)鴨類體內(nèi)細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種優(yōu)化的鴨IL-2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒及其制備方法。

背景技術(shù)

IL-2在多種免疫細(xì)胞中起作用，對Th1細(xì)胞有重要分化作用，能增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NKcell)、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的功能，并且誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子的產(chǎn)生，如T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，具有廣泛的上調(diào)作用。因此，可構(gòu)建IL-2和其他保護(hù)性抗原基因通過共表達(dá)提高DNA類制品的免疫效果.

IL-2還能顯著地增強(qiáng)IFN-γ和TNF的生成、增強(qiáng)NK細(xì)胞的功能、刺激B細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白。另外IL-2產(chǎn)生的CTL在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用，可以誘導(dǎo)和促進(jìn)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)和腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞(TIL細(xì)胞)，而NK細(xì)胞、CTL細(xì)胞、LAK細(xì)胞和TIL細(xì)胞等在機(jī)體的免疫監(jiān)視及腫瘤免疫方面作用至關(guān)重要。IL-2是與T淋巴細(xì)胞從細(xì)胞周期G1期到S期生長有關(guān)的主要細(xì)胞因子，其主要的生物活性是誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞的產(chǎn)生，并使致敏的CD4+T細(xì)胞活性增強(qiáng)，維持其持續(xù)克隆增長和在體外的長期生長，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。

醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)的研究證明，IL-2的免疫增強(qiáng)作用主要有以下幾方面：活化T細(xì)胞；促進(jìn)B細(xì)胞的分化和分泌抗體；活化NK、CTL和LAK細(xì)胞；促進(jìn)其它細(xì)胞因子的釋放，如IFN-α、IFN-β等；增強(qiáng)淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附分子的表達(dá)；促進(jìn)淋巴細(xì)胞及其它活化細(xì)胞的粘附及移動能力；增加抗原提呈細(xì)胞表面MHC I和II類分子的量，增強(qiáng)抗原提呈作用。

IL-2已被廣泛地應(yīng)用于免疫佐劑和免疫增強(qiáng)劑的研究。Li J等將雞IL-2作為佐劑和傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)多聚蛋白基因(VP2、VP4、VP3)DNA疫苗聯(lián)合免疫SPF雞然后攻毒，結(jié)果表明雞IL-2質(zhì)粒能明顯增強(qiáng)DNA疫苗對病毒攻擊的保護(hù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種根據(jù)鴨密碼子偏嗜性優(yōu)化的鴨IL-2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒及其制備方法。具體是構(gòu)建一種優(yōu)化的鴨IL-2基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒，該質(zhì)粒可以在細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)鴨IL-2蛋白，其可作為免疫增強(qiáng)劑和免疫佐劑使用，增強(qiáng)鴨類體內(nèi)細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。

本發(fā)明的第一個目的是提供一種優(yōu)化的鴨IL-2基因。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種含有優(yōu)化鴨IL-2基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種構(gòu)建鴨IL-2基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒的方法。

本發(fā)明的第四個目的是提供所述優(yōu)化的鴨IL-2基因和含有優(yōu)化鴨IL-2基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒在作為或制備免疫增強(qiáng)劑和免疫佐劑方面的應(yīng)用。

一種優(yōu)化的鴨IL-2基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

一種真核表達(dá)重組質(zhì)粒，是嵌入了所述優(yōu)化的鴨IL-2基因的真核表達(dá)載體，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

優(yōu)選地，所述真核表達(dá)載體為pCAGGK。