[發(fā)明專利]一種金針菇FL159菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜的鑒定方法及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110379036.5
• 申請(qǐng)日: 2021-04-08
• 公開（公告）號(hào): CN112961933B
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳瑩瑩;高利慧;鮑大鵬;李燕;王瑩;汪瀅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京燦爛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32356
• 代理人: 王江南

本發(fā)明公開了一種金針菇FL159菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜的鑒定方法及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，包括該指紋圖譜由6對(duì)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記組成。構(gòu)建方法包括：(1)菌絲培養(yǎng)；(2)基因組DNA的提取；(3)微衛(wèi)星DNA分子標(biāo)記的檢測(cè)；(4)毛細(xì)管電泳檢測(cè)。應(yīng)用包括：對(duì)金針菇菌種進(jìn)行微衛(wèi)星DNA標(biāo)記擴(kuò)增，將得到的帶型與指紋圖譜對(duì)照，與該組指紋圖譜一致即為金針菇FL159菌種。本發(fā)明與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測(cè)、拮抗試驗(yàn)、出菇試驗(yàn)相比，具有檢測(cè)時(shí)間短、準(zhǔn)確性高、可重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，在收集的國(guó)內(nèi)外105個(gè)金針菇栽培主栽菌種中具有金針菇FL159菌種的專一性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于金針菇菌種的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金針菇FL159菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜的鑒定方法及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

金針菇(Flammulinafiliformis)是一種普遍栽培的食用菌，通常分為白色和黃色品種。其栽培歷史悠久，生產(chǎn)總量逐年提升，目前已成為我國(guó)工廠化食用菌企業(yè)中發(fā)展速度最快、規(guī)模最大的一個(gè)品種。我國(guó)工廠化栽培金針菇的日產(chǎn)量約占我國(guó)食用菌工廠化總產(chǎn)量的47.12％。金針菇營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美且兼具藥用價(jià)值，不僅富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素等各種營(yíng)養(yǎng)成分，而且具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、降血脂、抗疲勞和護(hù)肝等多種藥用保健作用，深受消費(fèi)者喜愛。

優(yōu)質(zhì)菌種在金針菇單產(chǎn)和質(zhì)量中的貢獻(xiàn)率舉足輕重。我國(guó)的金針菇工廠化栽培菌株以國(guó)外選育的首潮產(chǎn)量高、生長(zhǎng)周期短和耐儲(chǔ)藏的白色菌株為主導(dǎo)。與國(guó)外相比，國(guó)內(nèi)金針菇育種工作相對(duì)滯后，也是導(dǎo)致目前國(guó)產(chǎn)菌株市場(chǎng)占有率小的原因。但是相對(duì)于目前主導(dǎo)的工廠化菌株而言，我國(guó)有著豐富的金針菇野生和自然栽培資源，高效利用這些優(yōu)質(zhì)的資源，拓展菌株的遺傳基礎(chǔ)，有利于國(guó)內(nèi)高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、特色金針菇菌株的選育。1999年，我國(guó)簽署了《國(guó)際植物新品種保護(hù)法》，這不僅要求我們尊重其它國(guó)家的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，同時(shí)也要加強(qiáng)保護(hù)我們國(guó)家自己的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)。為了建立食用菌新品種登記制度來(lái)真正保護(hù)我國(guó)的品種產(chǎn)權(quán)，必須首先建立成熟的品種鑒定技術(shù)，為新品種登記奠定基礎(chǔ)。就國(guó)內(nèi)而言，金針菇栽培菌種多樣性低導(dǎo)致的產(chǎn)品同質(zhì)化現(xiàn)象，不僅給生產(chǎn)企業(yè)帶來(lái)了經(jīng)濟(jì)損失，也極大地影響了中國(guó)金針菇產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展；另一方面，工廠化栽培方式和菌株退化現(xiàn)象對(duì)金針菇栽培菌株質(zhì)量的要求越來(lái)越高，需要發(fā)展更為簡(jiǎn)便、快速、精準(zhǔn)的菌株鑒定技術(shù)，以保證每批次使用的都是優(yōu)質(zhì)、準(zhǔn)確的菌種。

針對(duì)上述金針菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)開發(fā)精準(zhǔn)有效的金針菇菌種鑒定體系是一項(xiàng)極為重要的工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種金針菇“FL159”菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，該指紋圖譜與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測(cè)、拮抗試驗(yàn)、出菇試驗(yàn)相比，具有檢測(cè)時(shí)間短，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。

金針菇(Flammulina filiformis)FL159，于2021年2月8日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，地址為廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓，廣東省微生物研究所，保藏編號(hào)為GDMCC No：61516。

本發(fā)明的一種金針菇“FL159”菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜，該指紋圖譜由6對(duì)微衛(wèi)星DNA標(biāo)記組成，是基于金針菇基因組簡(jiǎn)單重復(fù)序列片段開發(fā)SSR引物，擴(kuò)增帶型好，重復(fù)性高的SSR引物，標(biāo)記詳細(xì)信息如表1：

表1微衛(wèi)星DNA標(biāo)記詳細(xì)信息列表

本發(fā)明的一種金針菇“FL159”菌種的微衛(wèi)星DNA標(biāo)記指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括：

(1)菌絲培養(yǎng)：將金針菇菌種轉(zhuǎn)接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基(PDA)上，25℃培養(yǎng)5～10d后收集菌絲；

(2)基因組DNA的提取：用TAKARA公司的TaqHotStart擴(kuò)增試劑盒提取上述菌絲的基因組DNA，紫外分光光度法檢測(cè)總基因組DNA濃度和純度，調(diào)整樣品DNA的濃度一致；