[發明專利]一種17-羥基孕酮和雄烯二酮的檢測方法

有效

• 申請號: 202110378880.6
• 申請日: 2021-04-08
• 公開（公告）號: CN113125597B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 趙蓓蓓;佘旭輝;陳秀如;董衡;陳靜宜;韋蘭清;蔡舒婷
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 曾銀鳳;顧書玲

1.一種17-羥基孕酮和雄烯二酮的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

待測樣本溶液的制備：使用自動取樣平臺將待測血清標本轉移至容器中，然后用自動移液平臺加入內標工作液并混合，再用自動移液平臺加入提取液并混合，離心，用自動移液平臺轉移上清液至另一容器中并濃縮，濃縮后用自動移液平臺加入復溶液并混合，離心，取上清液作為樣本待測溶液注入液相色譜串聯質譜儀進行測定；

所述使用自動移液平臺加入液體的程序依次包括以下步驟：吸嘴潤洗、前吸空氣、吸取液體、后吸空氣、打入液體、靜置、空氣吹打、再次空氣吹打、卸除吸嘴、設備復位；

所述液相色譜中使用平行液相色譜儀，所述液相色譜的流動相中，有機相是體積分數為0.08-0.3%的甲酸甲醇溶液，水相是體積分數為0.08-0.3%的甲酸水溶液；所述液相色譜的洗脫程序為：

0~2.00min，水相（60±2）%→（25±2）%，有機相（40±2）%→（75±2）%；

2.00~2.60min，水相（25±2）%，有機相（75±2）%；

2.60~2.61min，水相（25±2）%→0~2%，有機相（75±2）%→（98~100）%；

2.61~3.00min，水相（0~2）%，有機相（98~100）%；

3.00~3.01min，水相（0~2）%→（60±2）%，有機相（98~100）%→（40±2）%；

3.01~4.00min，水相（60±2）%，有機相（40±2）%；

所述液相色譜的色譜柱為Sigma-Ascentis?Express?-?C18色譜柱。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，使用自動移液平臺加入液體的程序依次包括以下步驟：吸嘴潤洗（4~6）次、前吸空氣（10±2）μL、吸取液體、后吸空氣（10±2）μL、打入液體、靜置（1~6）s、空氣吹打（10±2）μL、再次空氣吹打（10±2）μL、卸除吸嘴、設備復位。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述自動取樣平臺為Hamilton八通道自動取樣平臺；和/或，所述自動移液平臺為Agilent?Bravo自動移液平臺。

4.根據權利要求1~3任一項所述的檢測方法，其特征在于，液相色譜的色譜條件還包括：

柱溫：（50±2）℃；

流速：（0.40±0.04）mL/min；

進樣量：（40±4）μL；

和/或，質譜條件還包括離子源為電噴霧離子源，在正離子模式下，進行多反應監測模式。

5.根據權利要求1~3任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述內標工作液的制備包括：

取17-羥基孕酮-d₈、2,3,4-¹³C3雄烯二酮作為內標，用甲醇溶解，制備內標儲備液，再用30~40%（v/v）的甲醇水溶液稀釋所述內標儲備液，得到內標工作液；

和/或，所述提取液為甲基叔丁基甲醚；所述復溶液為體積分數為30-50%的甲醇水溶液；

和/或，通過自動取樣平臺進行取樣時，利用壓力感應進行取樣工作的監控，并保存每個樣本的取樣記錄，若出現壓力變化不合格的樣本，儀器會彈出錯誤窗口，并進行記錄，可在批量化的樣本取樣工作完成后，對取樣錯誤樣本進行重新取樣。