[發明專利]一種雞PEBP1基因多克隆抗體、制備方法及應用

在審

• 申請號: 202110378359.2
• 申請日: 2021-04-08
• 公開（公告）號: CN112940117A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 郭小權;胡國良;施燕;劉平;顧玥明;張彩英;劉佩;李慶慶;郭鳳萍;程素芳
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;C12N15/70;C12N15/12;A61K39/395;A61P9/12;A61P7/10;A61P9/04;G01N33/68
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張雪

本發明公開了一種雞PEBP1基因多克隆抗體、制備方法及應用，屬于生物技術領域。所述制備方法包括以PEBP1重組蛋白作為抗原免疫新西蘭大白兔，獲取多克隆抗體的步驟。通過該方法可以制備高質量的多克隆抗體，并且該多克隆抗體可用于動物機體中PEBP1蛋白的檢測，具有應用范圍廣、特異性強、操作簡便和費用較低等多方面優點，還為多種肉雞疾病病理機制的研究和診斷奠定了材料基礎和技術支持。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及一種雞PEBP1基因多克隆抗體、制備方法及應用，特別涉及一種與肉雞肺動脈高壓和腹水類疾病發生發展相關的雞PEBP1基因多克隆抗體、制備方法及應用。

背景技術

肉雞腹水綜合征(ascites syndrome，AS)曾叫做禽類水腫、充血性心衰和肺動脈高壓綜合征等，是一種比較常見的代謝紊亂、非傳染性疾病。該病最早發現于高海拔、寒冷的地區，其主要特征是心臟負荷增強、低氧血癥、右心肥大等，病理剖檢后可見腹腔中積聚大量淡黃色透明液體、心包積液、腎臟和肝臟充血腫大乃至壞死。研究表明，此類疾病主要發生于2-6周齡且體型較大的肉雞，并由營養、疾病、環境及飼養管理等多種因素共同作用導致。這是因為在肉雞生長的關鍵時期，肉仔雞的心肺發育尚未成熟，使其擴張受到限制，但生長速率過快會導致機體耗氧量達到心肺供氧的臨界點，當血流量增加時，受到肺臟的限制，其毛細血管過度充盈，肺血管阻力增強，進而導致肺動脈高壓形成腹水。此外，這類肺動脈高壓和腹水類疾病的發生會給養禽業帶來重大的經濟損失，該病一年四季皆可發生，寒冷的冬春季節較為多見，且病程較短，一般5-7天死亡，死亡率高達15％-30％。近年來，該病在肉雞飼養過程中經常發生，甚至會對全球養禽業的經濟效益造成嚴重損害。

磷脂酰乙醇胺結合蛋白1(PEBP1)，又稱為Raf激酶抑制劑蛋白(RKIP)，是一種具有高度保守性且與其他蛋白家族沒有顯著同源性的特殊調控因子。它廣泛存在于機體的多個組織或器官中，參與調節機體的各種生理活動。研究表明，PEBP1的表達與損傷細胞的侵襲以及血管形成程負相關。PEBP1本身可以與Raf-1相結合，并起到抑制Raf-1下游信號通路的作用，進而削弱損傷細胞的增殖擴散，降低動脈血管的過度形變和異常增生。防止因血管內皮細胞的損傷造成動脈血管的極度擴張和扭曲，進而降低肺動脈高壓和腹水類疾病的發生發展。此外，當機體處于一系列病理條件下時，PEBP1的磷酸化會抑制PEBP1與Raf-1之間的相互作用，反而和磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C(PC-PLC)發生相互結合，從而正向調控其活性。而PC-PLC參與了血管內皮細胞凋亡的信號通路，引起血管內皮細胞功能障礙，導致血管壁對細胞因子和脂質的滲透性增強，動脈壓強和阻力增大，加劇了動脈壁內皮細胞的損傷，最終導致腹水綜合征的形成。綜上可知，PEBP1與肉雞肺動脈高壓和腹水類疾病存在著密切的聯系。

同時，發明人在前期肉雞腹水綜合征的肺動脈組織轉錄組測序試驗結果中發現PEBP1基因水平呈顯著低表達。可見，PEBP1基因可以成為肉雞腹水綜合征疾病中檢測及治療靶點的潛在指標。目前對雞的PEBP1基因相關抗體的研究還是空白。因此，通過制備PEBP1基因多克隆抗體，將為肉雞腹水綜合征疾病等相關疾病的檢測及治療的研究提供了條件。

發明內容

本發明的目的是提供一種雞PEBP1基因多克隆抗體、制備方法及應用，以解決上述現有技術存在的問題，該多克隆抗體的制備簡便，成本低，靈敏度高，作用范圍廣，為后期PEBP1蛋白的檢測和腹水類疾病病理機制的研究提供了數據支持。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供了一種雞PEBP1基因多克隆抗體的制備方法，包括以PEBP1重組蛋白作為抗原免疫新西蘭大白兔，獲取多克隆抗體的步驟。

優選的是，所述PEBP1重組蛋白的制備包括以下步驟：

步驟1：獲取雞源PEBP1基因的核苷酸序列；

步驟2：利用步驟1所得的核苷酸序列構建PEBP1重組質粒，轉化大腸桿菌，培養，誘導，純化，得到PEBP1重組蛋白。