[發明專利]一種固液結合制備普卡那肽的方法

在審

• 申請號: 202110376921.8
• 申請日: 2021-04-08
• 公開（公告）號: CN112979759A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 李同金;徐英軍;趙傳海;路廣霞;嚴悅;楊旭
• 申請（專利權）人: 漢肽生物醫藥集團有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種固液結合制備普卡那肽的方法，首次采用Fmoc?Cys(Trt)?OH、Fmoc?Cys(Mmt)?OH、Fmoc?Cys(tButhio)–OH組合來合成普卡那肽，在4位半胱氨酸側鏈巰基采用tButhio保護，12位半胱氨酸側鏈巰基采用Mmt保護，7位和15位半胱氨酸側鏈巰基采用Trt保護；在固相樹脂上溫和的形成第一對二硫鍵4?12；然后經裂解、液相環化形成第二對二硫鍵7?15。本發明簡化了制備流程，減少了錯位配對的可能性，提高了粗肽的純度，降低了純化難度。

技術領域

本發明涉及多肽合成領域，特別涉及一種固液結合制備普卡那肽的方法。

背景技術

慢性特發性便秘（CIC）與便秘型腸易激綜合征(IBS-C)是2種常見的胃腸道疾病，全球發病率分別為12%～17%和11.2%，女性多于男性。二者都可表現為排便困難，糞便硬、干、小，排便次數減少，以及腹痛、腹脹和腹部不適等癥狀。慢性特發性便秘以便秘為主，而IBS-C以腹痛、腹脹、腹部不適為主。慢性便秘與IBS-C顯著影響患者的生命質量，并給醫療保健系統帶來沉重的經濟負擔。研究表明，每年美國用于評估和治療慢性便秘的費用超過70億美元，用于評估和治療IBS的費用超過200億美元。當年齡和性別相似時，IBS患者的醫療保健費用比沒有IBS者高50%。雖有多種治療方法，但上述2種疾病治療效果并不理想。常用的治療方法包括生活方式干預(如多喝水、鍛煉、添加膳食纖維等)和藥物治療(如滲透性瀉藥、潤滑劑、刺激性藥物等)。生活方式干預雖然安全，但除了對缺乏膳食纖維患者外，效果并不理想。在新型的治療藥物中，促分泌類藥物具有靶點和作用機制明確、特異性高、不良作用小等獨特優勢。這類藥物包括魯比前列酮(lubiprostone)、利那洛肽(linaclotide)和普卡那肽(plecanatide)等，均可促進腸液分泌，從而增加糞便含水量并增加排便頻率。

普卡那肽（Plecanatide）由美國Synergy制藥公司研發，美國食品藥品管理局(FDA)于2017年1月19日批準上市，商品名為Trulance?。普卡那肽具有促尿鈉排泄的鳥苷酸環化酶受體激動藥的作用，能調節胃腸道中的酸堿離子，誘導液體轉運進入胃腸道，增加胃腸道的蠕動和加速排便，適用于治療成人慢性特發性便秘。普卡那肽是尿鳥苷蛋白(uroguanylin)的類似物，含有16個氨基酸的環狀多肽，其序列為：H-Asn-Asp-Glu-⁴Cys-Glu-Leu-⁷Cys-Val-Asn-Val-Ala-¹²Cys-Thr-Gly-¹⁵Cys-Leu-OH (兩對二硫鍵：⁴Cys-¹²Cys和⁷Cys-¹⁵Cys)。

普卡那肽的合成方法，現有技術中報道的主要有：

專利US10011637采用片段法(6+7+2)合成線性肽H-Asn-Asp-Glu-⁴Cys-Glu-Leu-⁷Cys(Acm)-Val-Asn-Val-Ala-¹²Cys- Thr-Gly-¹⁵Cys(Acm)-Leu-OH，然后經雙氧水氧化成環⁷Cys-¹⁵Cys，再經碘/醋酸氧化成環⁴Cys-¹²Cys，得到普卡那肽。該專利的合成方法，主要缺點是經碘/醋酸氧化成環⁴Cys-¹²Cys后處理較復雜，收率較低。采用液相兩步氧化的專利還有CN108440652A，也是遇到同樣的問題。

CN107383170A采用Fmoc化學固相法合成線性肽，然后一步氧化形成兩對二硫鍵，得到普卡那肽。該專利的合成方法，主要缺點是容易形成二硫鍵配對錯誤的雜質，純化難度較大，總收率較低。CN110903350A通過引入假脯肽、Dmb二肽來固相合成肽樹脂，經裂解后一步氧化成兩對二硫鍵,同樣也未能解決容易形成二硫鍵配對錯誤的難題。