[發明專利]一種雞環狀RNA在促進成肌細胞的增殖的應用

有效

• 申請號: 202110376475.0
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN112941020B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 張麗;冷奇穎;安立龍;效梅;趙志輝;張為露;徐海冬;鄭嘉輝
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N15/85;C12Q1/6888;C12N15/113
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

本發明公開了一種雞環狀RNA在促進成肌細胞的增殖的應用，所述雞環狀RNA為circZNF609。證實了circZNF609是一個具有蛋白質編碼能力的circRNA分子。在DF?1細胞中，circZNF609能夠通過編碼的蛋白質抑制DF?1細胞增殖。在雞成肌細胞中，circZNF609能夠促進細胞增殖，并能夠影響ZNF609pre?mRNA及ZNF609mRNA的表達。circZNF609在正常與矮小雞腿肌中的表達差異極顯著，表明circZNF609促進肌肉發育有關。

技術領域

本發明涉及家禽育種技術領域，具體地，涉及一種雞環狀RNA在促進成肌細胞的增殖的應用。

背景技術

環狀RNA由于是前體mRNA經過反向剪接(back-splicing)而產生的，反向剪接導致了pre-mRNA的3′端和5′端發生了共價連接，因此circRNA相較于線性RNA，其具有不含5′帽子及3′尾巴這一顯著的結構特征，這一特征使circRNA擁有更高的穩定性。除此之外，circRNA還具有以下特征：(1)circRNA具有時空表達特異性，對90天和260天的牛乳腺組織進行測序，分別檢測出了4804和4084個circRNA，進行富集分析后發現僅有2231個是在兩個年齡階段共表達的，說明circRNA具有極強的時序表達特征；(2)序列保守性，對人類癌細胞測序發現，絕大多數circRNA中，外顯子的排列順序是與線性轉錄本一致的；(3)circRNA的序列來源包括外顯子，由一個或多個外顯子成環，有研究者推測，pre-mRNA進行反向剪接可能至少需要1個外顯子長度，在高表達的circRNA中絕大多數circRNA是由1個外顯子單獨成環的，四種經典的剪接方式已經全部出現在circRNA中，可變的反向剪接使一個基因的一個位點可以剪接形成多個circRNA；(4)circRNA的生成受到多種因素調控，最近的研究已經證實，circRNA的生成可以受到內含子反向互補序列、RNA結合蛋白、先天性免疫、細胞的全能性等等一系列生理因子及活動所調控。

雞在全世界廣泛飼養，具有重要經濟價值，雞肉作為當今社會最主要的食物之一，每年的消費量都在不斷的上漲，對于肌肉發育分子機制研究現將會有助于雞相關性狀的分子育種工作的開展。CN201711034206.6公開了一種與雞肌肉發育相關的SNP分子標記及其應用；CN201210160720.5一種抑制雞肌肉生成抑制素基因表達的siRNA及其應用，但是尚未有相關circRNA發現。

雞鋅指蛋白609(zinc finger protein 609,ZNF609)位于10號染色體的負鏈上，基因長度為41.67kb，含有11個外顯子，可以通過經典剪接方式剪接形成為一個線性轉錄(ZNF609-201)。ZNF609 mRNA可以翻譯長度為1417aa的蛋白，對雞ZNF609蛋白進行生物信息學分析發現其PH值為8.1，半衰期為1.9h，屬于不穩定蛋白，不穩定指數為54.57。尚未發現其與成肌細胞的增殖有相關性。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的上述不足，提供一種雞環狀RNA在促進成肌細胞和/或成纖維細胞的增殖的應用，本發明是一種內源競爭性RNA(ceRNA)分子更直接高效的分子技術。

為了實現上述目的，本發明是通過以下方案予以實現的：