[發明專利]采用親和層析純化減少抗體聚集的方法

在審

• 申請號: 202110373715.1
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN112898413A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 徐曉淵;張趕;梁泊寧;周佳豪;王貴衛;蔡子健;楊曉明;葉峰
• 申請（專利權）人: 杭州奕安濟世生物藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K19/00;C07K1/22
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發明涉及抗體純化技術領域，尤其是涉及一種采用親和層析純化減少抗體聚集的方法。采用親和層析純化減少抗體聚集的方法，包括如下步驟：采用洗脫緩沖液洗脫親和層析捕獲的目標蛋白；洗脫緩沖液選自pH3.4～3.8的NaAc?HAc緩沖液、甘氨酸緩沖液、檸檬酸緩沖液和精氨酸緩沖液中的至少一種；NaAc?HAc緩沖液的濃度為45～100mM，甘氨酸緩沖液的濃度為0.01～1.0M，檸檬酸緩沖液的濃度為20～100mM，精氨酸緩沖液的濃度為0.01～1.0M。本發明提供多種適于親和層析過程的洗脫緩沖液，可保護目標蛋白，減少親和層析洗脫后低pH滅活時抗體的聚集，極大的提高目標蛋白的純度，穩定目標蛋白。

技術領域

本發明涉及抗體純化技術領域，尤其是涉及一種采用親和層析純化減少抗體聚集的方法。

背景技術

親和層析是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法，可以用于生物分子的分離純化。

采用親和層析處理洗脫下的產品的pH相對較低，更適合進行低pH滅活；相較于SD滅活避免了試劑殘留等問題。但是，親和層析后低pH處理過程中存在抗體聚集的情況，現有技術中的洗脫策略并不能解決大部分情況下親和層析后低pH過程中抗體聚集的問題。

因而，急需針對不同情況，提供適于親和層析洗脫過程中保護和穩定抗體的洗脫緩沖體系，減少低pH滅活過程中抗體因為不穩定而聚集、提高產品純度的純化策略。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供采用親和層析純化減少抗體聚集的方法，以解決現有技術中存在的親和層析后低pH滅活過程抗體聚集的技術問題。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

采用親和層析純化減少抗體聚集的方法，包括如下步驟：

采用洗脫緩沖液洗脫親和層析捕獲的目標蛋白；

所述洗脫緩沖液選自pH 3.4～3.8的NaAc-HAc緩沖液、甘氨酸緩沖液、檸檬酸緩沖液和精氨酸緩沖液中的至少一種；

所述NaAc-HAc緩沖液的濃度為45～100mM，所述甘氨酸緩沖液的濃度為0.01～1.0M，所述檸檬酸緩沖液的濃度為20～100mM，所述精氨酸緩沖液的濃度為0.01～1.0M。

現有技術中，在親和層析過程中采用的常規洗脫緩沖液體系，親和洗脫后，一般有兩種方式選擇滅活：(1)低pH孵育，然后快速中和；(2)不進行低pH滅活，直接選擇SD滅活。對于目前的方案，目的蛋白如果在低pH條件下滅活，會導致聚集體含量升高。工藝無法滿足抗體生產需求。若采用相對較高的低pH進行滅活，保證聚體含量不上升，但這樣會影響病毒滅活效果，病毒滅活效果可能無法達到法規要求。而對于另一種滅活方法SD滅活，會存在后續去除及殘留問題等。病毒滅活步驟對于抗體來說是法規要求的重要且必須步驟。

在本發明的具體實施方式中，所述洗脫緩沖液選自緩沖液A～緩沖液F中的至少一種：

緩沖液A：pH 3.4～3.8、45～100mM NaAc-HAc緩沖液；

緩沖液B：pH 3.4～3.8、含50～200mM NaCl的45～100mM NaAc-HAc緩沖液；

緩沖液C：pH 3.4～3.8、0.01～1.0M甘氨酸緩沖液；

緩沖液D：pH 3.4～3.20～100mM檸檬酸緩沖液；

緩沖液E：pH 3.4～3.8、含0.01wt％～0.1wt％聚山梨酯80的45～100mM NaAc-HAc緩沖液；

緩沖液F：pH 3.4～3.8、0.01～1.0M精氨酸緩沖液。