[發明專利]一種檢測解脲支原體的引物、探針、試劑盒及其使用方法、應用

有效

• 申請號: 202110373186.5
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113025735B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 李騰;吳永輝
• 申請（專利權）人: 深圳易致生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市洪荒之力專利代理有限公司 44541
• 代理人: 王春穎

1.一種檢測解脲支原體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括引物以及探針；

所述引物由正向引物以及反向引物組成；

所述正向引物的序列為SEQ ID NO:1，所述反向引物的序列為SEQ ID NO:2；

所述探針的序列為SEQ ID NO:3，所述探針上分別標記有四氫呋喃、熒光報告基團、熒光淬滅基團以及間臂基團；

所述探針中部位置標記有四氫呋喃，所述四氫呋喃的上游和下游分別標記有熒光報告基團和熒光淬滅基團，所述探針的3’端末端標記有間臂基團；所述四氫呋喃標記在距離探針5’末端的33 nt的位置；所述熒光報告基團和熒光淬滅基團的間距為1 nt；所述熒光報告基團為FAM-dT或者HEX-dT，所述熒光淬滅基團為BHQ1-dT或者BHQ2-dT，所述間臂基團為C3Spacer；

所述試劑盒還包括：啟動液以及反應液；

所述啟動液包括：濃度為100~300 mM的MgCl₂；

所述反應液包括：濃度為10~100 mM的Tris-HCl緩沖液、濃度為10~200 mM的KCl、濃度為100~1000 μM的dNTPs、濃度為1~1000 U的Bsu聚合酶、濃度為50~2000 ng/μl的E.coliRecA重組酶以及濃度為0.01~50 U的Exonuclease IV 2U核酸外切酶。

2.根據權利要求1所述的檢測解脲支原體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：陽性對照品以及陰性對照品；

所述陽性對照品為含有解脲支原體核酸序列的pUC-57質粒，所述解脲支原體核酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.根據權利要求1所述的檢測解脲支原體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：內標品；

所述內標品為含有如SEQ ID NO:8所示的核酸序列的pUC-19質粒，所述內標品對應的檢測探針的序列為SEQ ID NO:7。