[發明專利]一種真核重組質粒及其在提高番茄果實色素積累中的應用

有效

• 申請號: 202110370984.2
• 申請日: 2021-04-07
• 公開（公告）號: CN113186208B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 唐曉鳳;劉永勝;汪宏濤;李佳男
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/113;C12N15/84;C12N15/64;A01H5/08;A01H6/82
• 代理公司: 湖北創融藍圖知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42276
• 代理人: 羊淑梅

1.一種真核重組質粒，其特征在于，由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中的基因片段和真核表達載體pBI121TFM7構成，所述基因片段是SEQ ID NO：1中第115bp至第524bp的核苷酸序列，所述基因片段正向和反向插入真核表達載體，正向插入的基因片段與反向插入的基因片段之間存在有150bp的內含子，所述真核表達載體pBITFM7的構建方法包括：

1)從番茄幼果中提取總DNA，利用PCR技術從番茄中分離得到一個果實特異性啟動子TFM7，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2)將步驟1)獲得的果實特異性啟動子TFM7替換真核表達載體pBI121中的35S啟動子，得到改造后的真核表達載體pBITFM7。

2.一種真核重組質粒的制備方法，其特征在于，步驟如下：

1)在SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中選擇一段基因片段，所選擇的基因片段是SEQ IDNO：1中第115bp至第524bp的核苷酸序列，將所述基因片段正向插入到質粒pSKint載體上形成中間載體，再將該基因片段反向插入已含正向插入基因片段的pSKint中間載體，正向插入的基因片段與反向插入的基因片段之間存在有150bp的內含子。

2)利用限制性內切酶切下pSKint中間載體上含有正向插入與反向插入的基因片段的部分，然后連接到真核表達載體pBI121TFM7上，即獲真核重組質粒，所述真核表達載體pBITFM7的構建方法包括：

(1)從番茄幼果中提取總DNA，利用PCR技術從番茄中分離得到一個果實特異性啟動子TFM7，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

(2)將步驟(1)獲得的果實特異性啟動子TFM7替換真核表達載體pBI121中的35S啟動子，得到改造后的真核表達載體pBITFM7。

3.權利要求1所述真核重組質粒在提高番茄果實色素積累中的應用。