[發明專利]一種熒光探針及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 202110370366.8
• 申請日: 2016-07-20
• 公開（公告）號: CN113277985B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 朱麟勇;楊弋;張大生;杜增民;鮑丙坤;林秋寧;陳顯軍;楊立朋;包春燕;葛一會;劉韌玫;陳政達;張思銅;李寧峰;華鑫
• 申請（專利權）人: 納瑩（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C07D239/47
• 分類號: C07D239/47;C07D473/30;C07D519/00;C07F7/08;C07D417/14;C07D417/12;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京坦路來專利代理有限公司 11652
• 代理人: 汪送來

1.一種熒光探針，包括：配體部分A，任選的連接體部分C和熒光染料部分，所述熒光染料部分為粘度響應性熒光染料基團，包括電子供體部分D、共軛體系B和電子受體部分，所述配體部分A為能夠與蛋白標簽或融合蛋白標簽的靶蛋白特異性識別并共價標記的基團；其特征在于，所述配體部分A通過連接體部分C共價連接于熒光染料部分的電子供體部分D；

其具有如式(I)所示的結構，

其中，

所述配體部分A-選自下式結構：

連接體部分C為-(C＝O)-；

式(I)中的式(I-R)所示結構部分為熒光染料部分，

其中：

電子供體部分-D-為-X₂-NX₁-，X₁選自氫、烷基，X₂為改性亞烷基，所述改性亞烷基為亞烷基的任意碳原子被選自-O-基團置換所得的基團，所述改性亞烷基具有1～30個碳原子；

所述共軛體系B選自式(I-1-5)、(I-1-11)、(I-1-19)、(I-1-22)～(I-1-24)中的結構：

電子受體部分具有如下式(I-2)所示的結構，

其中，

R₁選自氫；

R₂選自氰基、羧基、酯基、酰胺基、雜芳基、或改性烷基；

R₃為氰基；

其中，

所述烷基為具有1～30個碳原子的飽和脂肪族直鏈或支鏈的烷基；

所述亞烷基為具有1～30個碳原子的飽和脂肪族直鏈或支鏈的亞烷基；

所述改性烷基為烷基的任意碳原子被選自-O-、-OH、-CO-、伯氨基、仲氨基、叔氨基、-NH-CO-中的至少一種基團置換所得的基團，所述改性烷基具有1～30個碳原子；

所述碳原子被置換，是指碳原子或碳原子與其上的氫原子一起被相應的基團置換；

所述雜芳基或芳香雜環為環上含有選自N、O、S中的至少一種雜原子的5～10元單環或稠合雙環。

2.根據權利要求1所述的熒光探針，其特征在于：

所述改性烷基為含有選自-OH、-O-、C₁～C₈烷氧基、C₁～C₈酰基氧基、-O-CO-中至少一種基團的基團；

所述改性亞烷基各自獨立地為含有選自-(CH₂CH₂O)_n-的基團，其中，n為1；

所述C₁～C₈烷氧基為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基，C₁～C₈酰基氧基為乙酰氧基、丙酰氧基、異丙酰氧基。

3.根據權利要求1或2所述的熒光探針，其中，

所述式(I-2)結構為選自下式(I-2-1)～(I-2-4)、(I-2-6)、(I-2-7)、(I-2-9)、(I-2-17)、(I-2-18)中的一種：

4.根據權利要求1-3任一項所述的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針選自下式化合物：

5.制備權利要求1-4任一項所述的熒光探針的方法，其特征在于，包括式(II)所示熒光染料與配體以及連接體發生反應的步驟：

其中，D’反應后能夠形成D-基團與連接基團或配體鍵合。

6.一種熒光激活型蛋白特異性標記方法，其特征在于，包括以下步驟：將權利要求1-4任一項所述的熒光探針與蛋白標簽或者融合蛋白標簽的靶蛋白接觸，所述熒光探針的配體部分與蛋白標簽發生標記反應，將熒光探針標記到蛋白標簽上，所述將熒光探針標記到蛋白標簽上為共價標記，所述方法為非用于疾病的治療或診斷方法。

7.根據權利要求6所述的熒光激活型蛋白特異性標記方法，其特征在于，所述標記反應的反應介質選自純蛋白溶液、細胞裂解液或蛋白標簽或融合蛋白標簽的靶蛋白所處在的原位介質。