[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110368405.0
• 申請(qǐng)日: 2021-04-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113281505A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚勛;任煒佳;李丹月;柴娟;應(yīng)易恬;楊璟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/548;G01N33/531;C08J3/16;C08L5/12
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 陳升華

1.一種快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備瓊脂糖微球；

2)將IgG交聯(lián)在瓊脂糖微球上；

3)將交聯(lián)有IgG的瓊脂糖微球加入到待檢測(cè)牛奶樣品中，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)以擴(kuò)大細(xì)菌數(shù)量后，采用MTT法進(jìn)行顯色，如果MTT轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙瑒t提示樣品中含有金葡菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟1)中，所述的瓊脂糖微球的制備包括：

(1.1)水相配置：將瓊脂糖加入含NaCl的生理鹽水中，微波加熱至溶液變澄清，置80℃～95水浴保溫以去除氣泡，得到水相；

(1.2)油相配置：配置含Span80的液體石蠟，攪拌均勻后，加熱至65℃～85℃，得到油相；

(1.3)將水相和油相按體積比1：2～6混合，2000～4000rpm乳化5～20min，乳化過(guò)程在50℃～70℃水浴鍋中進(jìn)行；

(1.4)乳化完成后，將乳化產(chǎn)物置于2～8℃環(huán)境中保持5～15min；

(1.5)乳化產(chǎn)物依次用去離子水離心、體積百分?jǐn)?shù)10％～50％乙醇水溶液和無(wú)水乙醇洗滌；

(1.6)沉淀經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，收集瓊脂糖微球。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(1.1)中，所述的水相中瓊脂糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％～5％。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(1.2)中，所述的油相中Span80的體積百分?jǐn)?shù)為1％～4％。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(1.3)中，將水相和油相按體積比1：2～6混合。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟2)中，將IgG交聯(lián)在瓊脂糖微球上，具體包括：

(2.1)取瓊脂糖微球，用去離子水離心洗滌；

(2.2)將洗滌后的瓊脂糖微球加入含環(huán)氧氯丙烷的碳酸鈉水溶液中，置搖床中震搖；

(2.3)震搖后，用去離子水洗滌瓊脂糖微球，再用碳酸鈉水溶液洗滌；

(2.4)將IgG抗體溶于PBS中，配成濃度為1～4mg/mL IgG的PBS溶液，以0.2～0.5M碳酸鈉溶液為緩沖液，透析1～4h，得到純化的IgG溶液；

(2.5)將步驟(2.3)得到的瓊脂糖微球與純化的IgG溶液混合，震搖12h～24h，得到IgG-瓊脂糖微球；

(2.6)將IgG-瓊脂糖微球用去離子水洗滌，加入含乙醇胺的碳酸鈉水溶液中作用1～3h去除非特異性吸附，PBS洗滌，完成IgG交聯(lián)在瓊脂糖微球。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(2.2)中，含環(huán)氧氯丙烷的碳酸鈉水溶液中碳酸鈉的濃度為0.2～0.6M，含環(huán)氧氯丙烷的碳酸鈉水溶液中環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2％～10％。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(2.3)中，所述的碳酸鈉水溶液的濃度為0.2～0.5M。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(2.5)中，震搖12h～24h。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速檢測(cè)牛奶中金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，步驟(2.6)中，所述的含乙醇胺的碳酸鈉水溶液中乙醇胺的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2％～10％；所述的含乙醇胺的碳酸鈉水溶液中碳酸鈉的濃度為0.2～0.6M。