[發明專利]一種監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202110367507.0
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113073113B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 詹林盛;趙燕;周欠欠;孫蘇靜;王小慧
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/50;C12N15/65;A01K67/027;G01N21/64
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型的構建方法及應用，屬于動物模型構建技術領域。本發明首先構建了含真核啟動子、刺突蛋白S1基因和熒光報告基因的重組表達載體，通過轉染試劑將重組表達載體轉染至小鼠肺臟中，S1基因和熒光報告基因在小鼠體內轉錄和翻譯水平一致，當小鼠感染新冠病毒后，體內啟動了免疫應答，產生特異性殺傷S1蛋白的細胞毒性T細胞對感染肺部細胞清除，熒光報告蛋白也會隨S1蛋白一同被清除，可利用活體熒光成像系統實時監測小鼠體內熒光強度。因此，通過實時監測熒光強度實現評價小鼠體內CTLs功能強弱。本發明提供構建的可視化小鼠模型可用于新冠病毒的藥物或疫苗篩選和評價。

技術領域

本發明屬于動物模型構建技術領域，具體涉及一種監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型的構建方法及應用。

背景技術

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是一個大型病毒家族，可引起感冒、中東呼吸綜合征(MERS)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴重疾病。因此，基于小動物感染新型冠狀病毒的動物模型開展體內病毒清除監測和靶向藥物開發就變得尤為重要。新型冠狀病毒刺突蛋白的S1段(Spike S1)為病毒包膜的外段，是目前疫苗研發藥物開發的主要靶標，提示研究人員可以通過體內刺突蛋白S1的表達水平來評價特異性CTLS的功能。但目前仍沒有一種簡便快捷的手段能夠實現來實時無創的監測體內Spike S1特異性CTLs的功能。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種體內監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型的構建方法，為實時監測體內特異性CTLs對感染細胞的清除能力提供了可能。

本發明的目的還在于提供一種體內監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型在藥物篩選中的應用。

本發明提供了一種體內監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型的構建方法，包括以下步驟：

1)將真核啟動子、熒光報告基因和編碼新冠病毒刺突蛋白S1的基因插入真核表達載體中，得到重組表達載體；

2)將所述重組表達載體轉染小鼠，得到可視化小鼠模型。

優選的，步驟1)中所述真核啟動子、熒光報告基因和編碼新冠病毒刺突蛋白S1的基因以一個融合基因片段的形式插入真核表達載體中。

優選的，所述熒光報告基因和編碼新冠病毒刺突蛋白S1的基因之間用IRES片段連接。

優選的，步驟1)中所述熒光報告基因包括螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶或高斯熒光素酶。

優選的，步驟1)中所述編碼新冠病毒刺突蛋白S1的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

優選的，步驟1)中所述真核啟動子包括CMV啟動子、SV40啟動子、T7啟動子和PGK啟動子。

優選的，步驟2)中將所述重組表達載體轉染小鼠的方法是將所述重組表達載體、轉染試劑和等張葡萄糖溶液混合，經尾靜脈注射靶向遞送至小鼠體內。

優選的，所述重組表達載體的質量、轉染試劑的體積和等張葡萄糖溶液的體積比為18～22μg：3～3.5μL：100μL。

優選的，所述轉染試劑為jetPEI。

本發明提供了所述構建方法得到的體內監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型在篩選或評價治療新冠病毒感染的藥物或預防新冠病毒感染的疫苗中的應用。

本發明提供了所述構建方法得到的體內監測新冠病毒刺突蛋白S1特異性CTLs功能的可視化小鼠模型在作為評價過繼性細胞治療的載體中的應用。