[發(fā)明專利]一株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110366033.8
• 申請(qǐng)日: 2021-04-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113045648A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);曾露;匡華;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強(qiáng);吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/12
• 分類號(hào): C07K16/12;C12N5/20;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 無(wú)錫華源專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32228
• 代理人: 嚴(yán)梅芳

一株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株JSL3H3，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏編號(hào)CGMCC No.20786。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，對(duì)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌具有較好的特異性和檢測(cè)靈敏度。本發(fā)明合成了小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌完全抗原，并將它與等量弗氏佐劑混合乳化完全，通過(guò)背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，經(jīng)過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法的篩選和三次亞克隆，得到雜交瘤細(xì)胞株JSL 3H3。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，對(duì)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌具有較好的特異性，本發(fā)明成果可用于食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的特異性檢測(cè)，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

耶爾森氏菌屬屬于腸桿菌科，由三種人類致病菌組成：鼠疫耶爾森氏菌(鼠疫病原體)，假結(jié)核耶爾森氏菌和負(fù)責(zé)人腸道耶爾森氏菌病的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌。腸型耶爾森菌病是由于食用受污染的食物或水引起的食源性疾病，可通過(guò)糞-口途徑在人群之間傳播。腸型耶爾森菌病通常以在腸道中開(kāi)始的自限性急性感染為特征，并且通常限于回盲腸交界處。腹瀉是小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌感染的主要癥狀。此外，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌還可以引起不同的臨床癥狀，例如皮疹，結(jié)膜炎，急性器官衰竭和中毒性休克綜合癥，也可能發(fā)生更嚴(yán)重的感染和敗血癥，尤其是在新生兒，老年人和免疫功能低下的患者中。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌在世界范圍內(nèi)廣泛分布，在寒冷和溫帶地區(qū)發(fā)病率更高。大多數(shù)與人類耶爾森氏菌病相關(guān)的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌菌株均屬于2/O：9、4/O：3、2/O：5,27、3/O：3和1B/O：8血清型。據(jù)統(tǒng)計(jì)，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是法國(guó)和歐洲僅次于彎曲桿菌和沙門(mén)氏菌的第三大細(xì)菌性腹瀉病原體。

目前，通過(guò)從糞便培養(yǎng)物中直接分離腸致病性耶爾森氏菌，并在特定的肉湯中富集，然后再在頭孢磺啶-氯苯酚-新生霉素的半選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，生化鑒定，即可檢出小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌。然而，在選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，需要耗時(shí)的富集步驟。一些分子技術(shù)應(yīng)用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分析檢測(cè)，例如DNA菌落雜交，PCR，實(shí)時(shí)PCR，多基因座序列分型和脈沖場(chǎng)凝膠電泳等。但是，其中大部分技術(shù)都需要分離細(xì)菌或富集步驟，還需要特定的設(shè)備，及專業(yè)的操作人員。免疫分析由于操作簡(jiǎn)單、快速、實(shí)時(shí)檢測(cè)、反應(yīng)靈敏、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)廣泛地應(yīng)用于食源性致病菌分析檢測(cè)，為食源性致病菌提供另一種檢測(cè)途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株JSL 3H3，已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏編號(hào)CGMCC No.20786。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC No.20786的單克隆細(xì)胞株JSL 3H3分泌產(chǎn)生。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體的應(yīng)用。

本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述應(yīng)用是食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的分析檢測(cè)。

本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，一種試劑盒，含有所述的單克隆細(xì)胞株JSL3H3。所述試劑盒在檢測(cè)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌完全抗原的制備方法。

本發(fā)明的小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的篩選方法，主要包括以下步驟：