[發明專利]一株維生素K3

有效

• 申請號: 202110366032.3
• 申請日: 2021-04-06
• 公開（公告）號: CN113046325B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 胥傳來;曾露;匡華;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;C07K14/795;C07K14/77;C07K1/107;C07K1/02;G01N33/577;G01N33/82;C07C51/373;C07C59/86
• 代理公司: 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 嚴梅芳

一株維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。本發明維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株YCH 2G8，分類命名為單克隆細胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏編號CGMCC No.20785。此細胞株分泌的單克隆抗體，對維生素K₃具有較好的特異性和檢測靈敏度。本發明合成了維生素K₃半抗原，制備了維生素K₃完全抗原，并將它與等量弗氏佐劑混合乳化完全，通過背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，經過間接競爭酶聯免疫法的篩選和三次亞克隆，得到雜交瘤細胞株YCH 2G8。本發明提供的維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體，對維生素K₃具有較好的特異性和檢測靈敏度(IC₅₀值為0.49ng/mL)，為檢測強化食品和飼料中維生素K₃含量提供了免疫學方法。

技術領域

本發明涉及一株維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。

背景技術

維生素K₃，也稱為甲萘醌(2-甲基-1，4-萘醌)，是一種人工合成的脂溶性維生素，主要用作促凝血劑，參與光合作用機制，細胞呼吸，氧化磷酸化和抗癌劑。習慣飲食中維生素K的攝入量較低，以及關鍵的γ-羧化谷氨酸蛋白的低羧化現象在國際上普遍存在，增加維生素K的攝入對于改善公共健康非常重要。蔬菜和蔬菜菜肴是維生素K攝入來源，利用維生素K對食物進行生物強化是解決食物中維生素K攝入量低的重要潛在補充食品的方法。因此，準確測定強化食品中維生素K₃含量對于食品質量控制很有必要。如今，為了促進畜牧業或水產養殖業中的動物生長和疾病預防，許多外來物質不當地或非法地添加到動物飼料中，從而導致動物中的內源性物質缺乏。因此，為了防止動物的維生素K₃缺乏，經常不合理地將維生素K₃加入到動物食用飼料。但由于其毒性和不當添加容易在動物體內產生副作用，特別是對于新生動物。因此，監測飼料中VK₃的含量非常重要。

維生素K₃的測定方法包括儀器分析方法，高效液相色譜法(HPLC)，HPLC 結合各種檢測器，如熒光，紫外，電化學等。盡管這些方法在實際樣品的測試中通常是準確的，但它們具有一些缺陷包括耗時，成本高和復雜的提取步驟。此外，還有其他檢測技術可以檢測維生素K₃，如流動注射分析，熒光法，比色法和電化學方法，并且檢測限，線性范圍，選擇性和靈敏度等檢測性能都非常出色，短時間不適合用于篩查樣品中的大量測試樣品，仍需進一步提高用于確定實際樣品中維生素K₃的檢測性能且快速檢測樣本中的維生素K₃。免疫測定方法如酶聯免疫吸附測定(ELISA)，具有簡單和低成本的優點，使其達到篩選目的成為現實，為維生素K₃檢測提供了一種新的檢測途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用。

本發明的第一個目的是提供一株維生素K₃單克隆抗體雜交瘤細胞株YCH 2G8，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，分類命名為單克隆細胞株，保藏日期2020年9月27日，保藏編號CGMCC No.20785。

本發明的第二個目的是提供一種維生素K₃單克隆抗體，由CGMCC No.20785的單克隆細胞株YCH 2G8分泌產生。

本發明的第三個目的是提供維生素K₃單克隆抗體的應用，建立維生素K₃含量的免疫檢測方法。

本發明的一種實施方式中，所述應用是用于強化食品和飼料中維生素K₃的檢測。所述檢測領域為強化食品和飼料。