[發明專利]一種大口黑鱸腦細胞系及其應用

有效

• 申請號: 202110363152.8
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113025574B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 袁軍法;戴彩姣;余利;李莉娟
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛

本發明公開了一種大口黑鱸腦細胞系及其應用，所述大口黑鱸腦細胞系已于2021年03月25日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO:C202166。本發明所述的大口黑鱸腦細胞系MSBr傳代穩定，目前已成功傳代超過65代且生長狀態良好，且該細胞系適用范圍廣泛，不僅可用于病毒分離鑒定、病原功能研究、環境污染物檢測、基因篩選和功能分析及魚類腫瘤研究等，同時還可用于水產動物病毒性疾病的監測、診斷及流行病學調查研究，相關病毒性疾病的診斷試劑盒開發和疫苗研制等，具有較大的應用價值和社會經濟價值。

技術領域

本發明屬于水生生物細胞與水產養殖病害防控技術領域，具體涉及一種大口黑鱸腦細胞系及其應用。

背景技術

水生動物(主要為魚類)的細胞培養研究晚于哺乳動物，始于20世紀60年代。1962年，Woft和Quimby建立了世界上第一個魚類細胞系，即虹鱒魚生殖腺細胞系。此后，魚類細胞培養研究十分迅速，全世界已報道的魚類細胞系有275株。我國魚類細胞的培養始于20世紀70年代末，張念慈等建立的草魚吻端組織二倍體細胞株是我國首個魚類細胞系。目前建立的魚類細胞系大約有70多株，多數來自于海水魚類。細胞株作為具有生物活性的體外材料，有著活體魚無法比擬的優點:細胞的培養和維持不需要大型的養殖設備，成本低；細胞個體大小均一，遺傳背景極為相似，實驗條件可以精確控制，重現性好。因此魚類的細胞系是進行病毒學研究、環境毒物檢測、生理學、免疫學、基因功能分析、細胞工程育種和種質保存等研究的重要材料和模型。目前魚類原代細胞的建立技術雖然較為成熟，但是要獲得針對病毒敏感的傳代細胞系仍存著較大的偶然性和困難性，所以建立一株目標魚類細胞系需要制備大批量的原代細胞株，從而篩選出敏感的細胞系，這是一項費時耗力的工作。

大口黑鱸(Micropterus salmoides)又名加州鱸，隸屬于鱸形目、太陽魚科、黑鱸屬，原產地為美國加利福尼亞州密西西比河水系，由于其肉質鮮嫩美味、抗疾病能力強、生長迅速、易起捕、適合溫度廣的特點被世界各地相互引進。我國于1983年在廣東佛山引進加州鱸，并在1985年人工繁育成功。經過40多年的發展，加州鱸已經成為我國重要的經濟養殖品種。然而，隨著人工集約化程度不斷提高，養殖密度持續升高，加州鱸病害層出不窮，尤其是病毒性疾病。彈狀病毒以及虹彩病毒是加州鱸病毒性疾病的主要病原。近年來，加州鱸彈狀病毒病已在加州鱸苗種培育過程中大量暴發，嚴重時80％池塘發病，死亡率短時間內可高達90％，用藥效果不佳，經濟損失巨大。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的缺陷，提供了一種大口黑鱸腦細胞系及其應用，該細胞系傳代穩定，目前已成功傳代超過65代且生長狀態良好，且該細胞系適用范圍廣泛，不僅可用于病毒分離鑒定、病原功能研究、環境污染物檢測、基因篩選和功能分析及魚類腫瘤研究等，同時還可用于水產動物病毒性疾病的監測、診斷及流行病學調查研究，相關病毒性疾病的診斷試劑盒開發和疫苗研制等，具有較大的社會經濟價值。

本發明的目的之一在于提供了一種大口黑鱸腦細胞系，該細胞系已于2021年03月25日保存于中國典型培養物保藏中心，地址為：中國武漢市武漢大學，所述大口黑鱸腦細胞系的保藏編號為：CCTCC NO:C202166。

進一步的，所述大口黑鱸腦細胞系的培養溫度為28℃。

進一步的，所述大口黑鱸腦細胞系的培養過程中，胎牛血清的體積濃度為10％或15％。

本發明的目的之二在于提供了上述大口黑鱸腦細胞系的構建方法，所述方法包括：

S1、取大口黑鱸麻醉后，抽干血液后在75％酒精中浸泡2min，然后在無菌條件下取大口黑鱸的腦組織；

S2、將腦組織經無菌PBS緩沖液漂洗后，置于AIM培養液中浸泡30min；

S3、將腦組織剪成1mm³大小，加入胰蛋白酶于28℃消化20min；