[發明專利]硫苷轉運相關的甘藍型油菜BnaA09.GTR2基因及其應用

有效

• 申請號: 202110361987.X
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN112877341B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 張園園;何貽洲;劉勝毅;劉越英;黃軍艷;程曉輝
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/10;A01H6/20
• 代理公司: 深圳智趣知識產權代理事務所(普通合伙) 44486
• 代理人: 崔艷崢

1.一種基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體，所述基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體轉入甘藍型油菜能夠獲得種子中總硫苷含量降低的甘藍型油菜材料，其特征在于，所述基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體對甘藍型油菜BnaA09.GTR2基因進行定向編輯，所述BnaA09.GTR2基因的基因組區的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；在甘藍型油菜BnaA09.GTR2外顯子區域選取以堿基NGG結尾的DNA片段作為靶位點；

所述靶位點的一條鏈具有5’-(N)XNGG-3’結構，其中(N)X中的X表示數目為X的一條堿基序列，(N)X中的N代表堿基A、G、C、T中的任意一種，X為19或20；所述靶位點序列如SEQ IDNO.4和SEQ ID NO.5所示。

2.一種重組菌株，其特征在于，所述重組菌株中轉入了權利要求1所述的基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體。

3.權利要求1所述的基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體在降低油菜種子中總硫苷含量中的應用，其特征在于，將所述基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體轉化微生物培養表達，轉化目標植物，獲得BnaA09.GTR2基因敲除突變體，所述轉化方式為農桿菌介導、花粉管通道法、基因槍法、顯微注射法中的任意一種。

4.一種降低油菜種子中總硫苷含量的方法，其特征在于，所述方法包括在油菜中轉入權利要求1所述的基因定向編輯CRISPR/Cas9重組載體，獲得BnaA09.GTR2基因敲除突變體。