[發明專利]新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其構建方法

有效

• 申請號: 202110361745.0
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN112852762B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 李明義;劉剛;衣春霖;馬鳳龍;王宗科;夏玉潔;崔曉辰;楊珍;常宏賞;趙冰冰;孫艷紅
• 申請（專利權）人: 青島海華生物醫藥技術有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;A61K39/215;A61P31/14;A61P11/00;C12R1/93
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 高洋;牛繼梅

本發明公開了一株新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其構建方法，屬于病毒疫苗株構建技術領域。本發明新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株的構建方法，是將副粘病毒科VII型新城疫病毒的N、F基因與同屬于副粘病毒科的犬瘟熱病毒的P、M、H、L基因進行重組，將新型冠狀病毒S1基因插入重組病毒的P基因與M基因之間獲得新型冠狀病毒肺炎副粘病毒的全基因組；通過反向遺傳操作構建而成。本發明構建的新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株能夠穩定高效表達新冠S1蛋白，注射動物后能夠誘導機體產生抗體。而且，可以在禽類和犬類中進行實驗，能夠節約時間、降低成本，同時由于其產量大，更利于實際生產。

技術領域

本發明屬于病毒疫苗株構建技術領域，具體涉及一株新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其構建方法。

背景技術

2019年以來，新冠病毒肆虐，在全球廣泛傳播，造成了大量的人員傷亡。目前雖有疫苗問世，但產量較低，遠遠不能滿足市場需要。目前有研究表明，新冠S蛋白在病毒感染以及誘導產生中和抗體方面有重要作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一株新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其構建方法。

為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一株新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株的構建方法，將VII型新城疫病毒的N、F基因與犬瘟熱病毒的P、M、H、L基因進行重組，將新冠病毒S1基因插入重組病毒的P基因與M基因之間獲得新型冠狀病毒肺炎副粘病毒的全基因組；通過反向遺傳操作構建而成。

在本發明的一個實施例中，所述反向遺傳操作為：將構建的新型冠狀病毒肺炎副粘病毒的全基因組重組載體與分別包含NP、P、L基因的三個輔助重組質粒轉染能夠表達T7RNA聚合酶的細胞系；經培養獲得新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株。

在本發明的一個實施例中，所述能夠表達T7 RNA聚合酶的細胞系是由T7 RNA聚合酶基因與PCI-neo載體連接后，轉染BHK-21細胞獲得的。

上述方法構建的新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株，保藏編號為CCTCC NO:V202119，地址為中國武漢，武漢大學的中國典型培養物保藏中心。

上述新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株在制備疫苗中的應用。

在上述方案的基礎上，所述疫苗對2019-nCoV引起的新型冠狀病毒肺炎具有預防保護作用。

本發明技術方案的優點

本發明將新冠病毒S1基因插入重組病毒載體，構建的新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株能夠穩定高效表達新冠S1蛋白，注射動物后能夠誘導機體產生抗體。該種方法改造的疫苗株可以方便在雞胚中繁殖且操作簡單，成本低、產量大，更利于實際生產。而且該疫苗株也可以在禽類和犬類中進行實驗，能夠節約時間、降低成本。

此外，現有痘病毒、腺病毒載體存在預存免疫，皰疹病毒的親神經性可能導致安全問題。本發明中采用的犬瘟熱病毒屬于副粘病毒科病毒，麻疹病毒屬，對哺乳動物細胞具有侵染性但對人不致病，犬瘟熱病毒能夠穩定表達外源蛋白，而且非人為情況下幾乎不會發生基因突變現象，是一種良好的疫苗載體。新城疫病毒屬于副粘病毒科病毒，可以在哺乳動物細胞或者9-11日齡雞胚中繁殖培養，具有操作簡單，成本低、產量大等優點。最終，本發明方法構建的疫苗株在細胞質進行復制，不會整合到宿主基因組中，且病毒載體幾乎不發生基因突變，安全性高；可在雞胚上增殖，生產成本低。

附圖說明

圖1新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株表達S1蛋白的鑒定。

具體實施方式

在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。

下面結合具體實施例，并參照數據進一步詳細的描述本發明。以下實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。