[發(fā)明專利]羊口瘡病毒抗體捕捉劑及其試劑盒和檢測(cè)方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110360839.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-02
• 公開（公告）號(hào): CN113265005B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮮思美;張友;粟朝芝;王徳鳳;包濤濤;楊倩;顧慶林;梁倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京元本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發(fā)明屬于生物免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種基于羊口瘡病毒B2L、F1L截短融合蛋白的羊口瘡病毒抗體捕捉劑及其試劑盒和檢測(cè)方法與應(yīng)用。編碼所述羊口瘡病毒抗體捕捉劑的核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列，其0.25μg/mL濃度包被的固相載體的ELISA試劑盒檢測(cè)羊口瘡病毒的方法還包括：將待檢測(cè)血清按照1:200倍數(shù)稀釋作為一抗孵育1h，洗滌；然后加入稀釋倍數(shù)1:8000±50的辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊IgG作為二抗孵育1h，洗滌。該羊口瘡病毒抗體捕捉劑及其試劑盒和檢測(cè)方法對(duì)羊口瘡病毒特異性強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種基于羊口瘡病毒B2L、F1L截短融合蛋白的羊口瘡病毒抗體捕捉劑及其試劑盒和檢測(cè)方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

羊傳染性膿皰皮炎，又名羊傳染性口炎，俗稱“羊口瘡”，是由羊口瘡病毒(orfvirus，OrfV)感染山羊或綿羊所引起的一種急性、嗜上皮性的人獸共患傳染病，我國(guó)將其列為三類動(dòng)物傳染病。該病傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高，主要以接觸性感染為主，感染羊只以口唇、鼻鏡等皮膚部位出現(xiàn)紅斑、膿皰、結(jié)痂等病變?yōu)樘卣鳎瑖?yán)重影響羊只采食，導(dǎo)致羊消瘦、免疫力低下，繼發(fā)感染其他病原體，從而導(dǎo)致發(fā)病羊死亡率升高，嚴(yán)重阻礙了養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。羊口瘡在我國(guó)多地流行，主要分布于我國(guó)的東北、西南等養(yǎng)羊地區(qū)，如新疆、吉林、云南、貴州等地都有羊口瘡的流行報(bào)道。隨著養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，規(guī)模化養(yǎng)羊加速了羊口瘡的傳播，同時(shí)對(duì)養(yǎng)羊業(yè)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展影響愈發(fā)嚴(yán)重。

趙魁.羊傳染性膿皰病毒重組DNA疫苗的構(gòu)建與實(shí)驗(yàn)免疫研究[D].吉林大學(xué),2010.成功構(gòu)建了pCDNA3.1-ORFV 011(B2L)、pCDNA3.1-ORFV 059(F1L)和pCDNA3.1-ORFV011(B2L)-linker-ORFV(F1L)疫苗質(zhì)粒；通過小鼠試驗(yàn)證明了pCDNA3.1-ORFV011(B2L)-linker-ORFV(F1L)疫苗質(zhì)粒免疫效果優(yōu)于pCDNA3.1-ORFV 011(B2L)、pCDNA3.1-ORFV 059(F1L)疫苗質(zhì)粒。劉嬡.IL-2基因佐劑對(duì)羊口瘡病毒核酸疫苗免疫效果的影響研究[D].貴州大學(xué),2016成功構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L和pVAX1-B2L，李婷.羊口瘡病毒B2L和F1L基因融合真核表達(dá)及誘導(dǎo)小鼠免疫原性研究[D].貴州大學(xué),2019.成功構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-B2L-F1L，并通過免疫小鼠證明其具有良好的免疫原性。馮平,李云章,孫豐廷,等.羊口瘡病毒榆林株B2L和F1L串聯(lián)基因在昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)的表達(dá)[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2018,46(06):1-8.等通過將B2L和F1L基因串聯(lián)，并在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功獲得了部分分泌型的B2L和F1L串聯(lián)重組蛋白。陳曉.上海株OrfV雙基因重組腺病毒的構(gòu)建及免疫原性研究[D].錦州醫(yī)科大學(xué),2018.以腺病毒為載體，構(gòu)建能串聯(lián)表達(dá)F1L和B2L蛋白的重組腺病毒，并通過小鼠免疫試驗(yàn)進(jìn)行免疫效果評(píng)價(jià)。

OrfV主要感染山羊和綿羊，以感染羔羊?yàn)橹鳎灿懈腥酒渌麆?dòng)物的報(bào)道，如犬、貓等，也可感染人，且感染宿主在不斷擴(kuò)大，是一種人獸共患傳染病，威脅公共衛(wèi)生安全。OrfV變異較強(qiáng)，因此，防控該病及其傳染十分困難，在羊群中與羊相關(guān)的食源的羊口瘡病毒檢測(cè)是有必要的，通過抗體診斷或流行病學(xué)調(diào)查可以判斷該地方的OrfV感染和流行現(xiàn)狀，從而制定有效的防控措施。間接ELISA方法是檢測(cè)OrfV抗體的重要手段，但由于目前商品化的試劑盒檢測(cè)效果較差，易出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性，因此，建立一種檢測(cè)OrfV抗體的間接ELISA方法非常有必要。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明在于提供一種羊口瘡病毒抗體捕捉劑及包含其的羊口瘡病毒ELISA檢測(cè)試劑盒。該試劑盒檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)。

所述羊口瘡病毒抗體捕捉劑與所述羊口瘡病毒抗體特異性結(jié)合，編碼所述羊口瘡病毒抗體捕捉劑的核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列。所述羊口瘡病毒抗體捕捉劑的氨基酸序列包括如SEQ ID NO.2所示的序列。