[發明專利]一種帕金森病伴發抑郁細胞模型及其制備方法和用途有效
| 申請號： | 202110359813.X | 申請日： | 2021-04-02 |
| 公開（公告）號： | CN112899234B | 公開（公告）日： | 2022-08-19 |
| 發明（設計）人： | 王海明;崔藝馨;楊明會;李紹旦;張俊修 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍總醫院第一醫學中心 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09;C12N13/00;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217 | 代理人： | 高正方 |
| 地址： | 100853*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 帕金森病 抑郁 細胞 模型 及其 制備 方法 用途 | ||
1.一種帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法，其特征在于，所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法包括：
步驟一，獲取SH-SY5Y細胞，將獲取的SH-SY5Y細胞在基礎培養基中培養至一定融合度，進行消化，獲得SH-SY5Y細胞懸液；
步驟二，將得到的SH-SY5Y細胞懸液接種于6孔板中，并利用極低頻脈沖電磁場對SH-SY5Y神經細胞進行刺激培養一段時間；
步驟三，步驟二培養得到的SH-SY5Y細胞在含有多聚賴氨酸以及全反式維甲酸的培養基中進行誘導培養后，并利用D-Hanks’液清洗2遍；
步驟四，向孔內加入包含6-OHDA與皮質酮的無FBS的DMEM培養液，邊對培養基中的細胞進行電處理邊孵育即可得所述帕金森病伴發抑郁細胞模型；
步驟一中，所述，將獲取的SH-SY5Y細胞在基礎培養基中培養至一定融合度，進行消化，獲得SH-SY5Y細胞懸液包括：
(1)將SH-SY5Y細胞放置于基礎培養基中在35-38℃、4.5-6.5％的CO2、飽和濕度下進行培養；
(2)待細胞長滿細胞培養板后，利用0.3％的胰酶消化后進行離心；收集細胞，正常DMEM培養液重懸，即可得到H-SY5Y細胞懸液；
所述利用極低頻脈沖電磁場刺激SH-SY5Y神經細胞包括：
采用信號頻率為60Hz、輸出電流為0.2A，脈沖電磁場輸出頻率為60Hz、電流強度為0.2A的脈沖波形刺激SH-SY5Y神經細胞。
2.如權利要求1所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法，其特征在于，所述基礎培養基為包含10％胎牛血清、2％雙抗以及2％谷氨酰胺的DMEM-F12培養基；所述培養基每28小時更換一次液體。
3.如權利要求1所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟二中，所述接種密度為6×105～8×105/孔。
4.如權利要求1所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟四中，所述無FBS的DMEM培養液中包含60mM/L的6-OHDA與90μM/L的皮質酮。
5.如權利要求1所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法，其特征在于，所述對培養基中的細胞進行電處理包括：
利用腦深部電磁耦合刺激與電信號檢測的探針對培養基中的細胞進行電處理。
6.一種利用如權利要求1-5任意一項所述帕金森病伴發抑郁細胞模型的構建方法構建的帕金森病伴發抑郁細胞模型。
7.一種如權利要求6所述帕金森病伴發抑郁細胞模型在篩選藥物中的用途。
8.如權利要求7所述用途，其特征在于，所述用途包括：在篩選改善或治愈帕金森病伴發抑郁的藥物中的應用。
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