[發明專利]一種SLC25A13基因突變位點檢測試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202110359382.7
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113174432B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 黃新文;朱琳;胡真真;蔣夢怡;周朵;胡凌薇;張超
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明公開一種SLC25A13基因突變位點檢測試劑盒及方法。所述試劑盒主要成分為PCR擴增引物SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28和質譜延伸引物SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43。通過使用本發明試劑盒，能夠一次性同時準確檢測出SLC25A13基因15個突變位點，具有高效、高通量、低成本、自動化的優點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種檢測SLC25A13基因位點突變試劑盒及檢測方法，是一種基于MassARRAY質譜平臺的SLC25A13基因突變型檢測方法。

背景技術

希特林蛋白缺乏癥(Citrin deficiency)是由SLC25A13基因突變引起的Citrin轉運體功能障礙的一種常染色體隱性遺傳疾病。本病發病時期從新生兒到成人年齡不一，根據發病年齡不同，臨床表現不同，早期發病多表現為肝內膽汁淤積(NICCD)，脂肪肝，成人期發病(CTLN2)多為高氨血癥、脂肪肝或合并胰腺炎、肝細胞癌等，同時不同發病期都伴有不同程度的高氨血癥和高瓜氨酸血癥，臨床上容易與其他肝病、膽汁淤積性肝炎、氨基酸代謝疾病等混亂。

目前，我國采用串聯質譜技術(MS-MS)測定新生兒末梢血中瓜氨酸濃度來對該病進行早期篩查。但據研究報道，僅40-50％的NICCD患者通過新生兒串聯質譜篩查最終確診，大多數患者出現黃疸、發育遲緩等癥狀后才就醫確診，原因可能為部分患者瓜氨酸遲發升高，新生兒串聯篩查結果陰性，導致該疾病漏篩率較高。有研究采用分子檢測技術對SLC25A13基因3個熱點突變進行該疾病新生兒篩查，檢出率雖有所提高但仍遠低于發病率。在臨床實踐中隨著NICCD患者數的不斷增加，該病日益得到臨床醫生的重視。因此，急需提高NICCD新生兒篩查的敏感性。

國內外正式報道的SLC25A13突變類型超過60余種，我國人群突變頻率最高主要為c.851_854del4bp、IVS16ins3kb、c.1638_1660dup、IVS6+5GA、c.1399CT，總體大約占NICCD患者的85％以上。該基因突變在我國患者中高度的集中性，突變熱點明確，有利于進行早期新生兒基因篩查。

發明內容

本發明的目的在于提供一種SLC25A13基因突變位點檢測試劑盒，是一種基于MassARRAY質譜平臺的SLC25A13基因突變檢測試劑盒。

本發明提供的試劑盒，由PCR擴增引物和質譜延伸引物，10×PCR反應緩沖液、dNTPMix(25mM)、MgCl₂(25mM)、PCR反應Taq酶、SAP反應緩沖液、SAP酶、iPlex反應緩沖液、iPlexTermination Mix、Extension反應Taq酶、MassARRAY芯片組成。其中：PCR擴增引物序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示，質譜延伸引物序列如SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43中所示。

所述的PCR擴增引物為包含序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示的1管擴增引物的混合物，所述的PCR延伸引物為包含序列如SEQ ID NO:29～SEQ ID NO:43中所示的1管延伸引物的混合物。

本發明的另一目的在于克服現有技術的不足，提供一種檢測SLC25A13基因突變試劑盒的使用方法，通過以下步驟實現：

(1)設計如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:28所示的擴增引物和如SEQ ID NO:29～SEQID NO:43所示的延伸引物；

(a)PCR擴增引物：

PCR擴增引物為根據SLC25A13基因設計的特異性針對15個熱點突變位點的擴增引物，所述擴增引物可擴增包括突變位點在內的一段DNA序列。