[發明專利]一種刺蝦熒光素酶Nluc的突變體及其應用

在審

• 申請號: 202110358434.9
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN115161296A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 張維;王佑富;鄭越;董宇亮;章文蔚
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/85;C12N1/21;C12N5/10;C12Q1/26;C12R1/19
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

1.一種刺蝦熒光素酶Nluc的突變體，其特征在于，所述突變體與如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列相比在第19位、第20位、第27位以及第28位中的一位或多位發生突變。

2.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述第19位的突變為D19N/P/E/G/S；所述第20位的突變為Q20R；所述第27位的突變為V27A/N/L/T/M/S；所述第28位的突變為S28A/N/V/D/P/G/I/M；

較佳地，所述突變體包含D19G、V27L/T/M、和/或S28A/N/M/V/D；

更佳地，所述突變體包含D19G、V27L、V27T、V27M、S28A、S28N、S28M、S28V、S28D，或同時包含D19P、V27L和S28P。

3.一種分離的核酸，其編碼如權利要求1或2所述的突變體；

較佳地，所述核酸的堿基序列如SEQ ID NO:3-12中任一個所示。

4.一種重組表達載體，其包含如權利要求3所述的分離的核酸，所述重組表達載體的骨架優選pET28a或pcDNA3.1質粒。

5.一種轉化體，其含有如權利要求3所述的分離的核酸，或如權利要求4所述的重組表達載體；

所述轉化體構建時使用的宿主細胞優選為大腸桿菌或哺乳動物細胞；所述大腸桿菌優選為E.coliBL21(DE3)；所述哺乳動物細胞優選為CHO細胞或HEK293細胞。

6.一種制備如權利要求1或2所述的突變體的方法，其包括培養如權利要求5所述的轉化體得發酵產物，并從發酵產物中獲得所述突變體。

7.一種催化底物發光的方法，其包括以下步驟：利用如權利要求1或2所述的突變體進行底物的催化。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述突變體的濃度為0.1μg/ml～10μg/ml，優選1μg/ml；

和/或，所述底物為Furimazine或氟代腔腸素；其濃度為1μM～1000μM，優選100μM。

9.如權利要求1或2所述的突變體、權利要求3所述的分離的核酸、權利要求4所述的重組表達載體或者權利要求5所述的轉化體在催化底物發光中的應用。

10.一種用于篩選刺蝦熒光素酶Nluc的突變體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括檢測如權利要求1或2所述的突變體的試劑，和/或檢測如權利要求3所述的核酸的試劑，和/或檢測如權利要求4所述的重組表達載體的試劑，和/或檢測如權利要求5所述的轉化體的試劑。